[发明专利]一种脂肪组织冻存液、冻存方法及其应用

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种脂肪组织冻存液、冻存方法及其应用，所述冻存液包括DMEM培养基、蔗糖、丙二醇、脯氨酸、四氢甲基嘧啶、超氧化歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、生育酚。本发明制备的冻存液中没有添加血清，避免了病原微生物的污染和排异反应的发生，且没有添加具有强烈毒性的DMSO，避免了培养出具有毒性的脂肪组织。本发明对脂肪组织的冻存效果好，脂肪组织细胞活性高，细胞凋亡率低，且制备方法简单易操作，可为该领域的研究和发展提供新的思路。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种脂肪组织冻存液、冻存方法及其应用。

背景技术

随着生活水平的提高，人们不只是满足于身体的健康，而是将更多的注意力转移到自身的形象上，对美的追求也更加迫切。自体脂肪是一种理想的填充材料，几乎可用于全身各个部位软组织缺损治疗，国内外的研究人员进行了大量的研究以提高成活率和减少吸收率，然而，目前进行填充移植后保存的脂肪组织体积最终也只能保持在注射时的20-30％左右，因此为了达到满意的填充效果，临床上常常需要进行再次或者多次填充移植。反复的脂肪抽取操作既增加了医生的工作量，又增加了患者为取材而吸脂的手术痛苦和手术风险，并且造成较高的费用也为患者带了了较大的经济负担。

在此背景下如果能通过一次吸脂手术获得足够的脂肪组织，同时将获取的富余脂肪进行体外长期冷冻储存，在需要脂肪组织移植时复温即可使用，则会大大减轻患者的压力。目前国内外关于人颗粒脂肪组织储存冷冻保护剂的研究较少，用于冻存其他细胞或组织时的冷冻保护剂是否可保存脂肪组织中细胞的完整结构和活力的研究还鲜见报道，本专利将提供一种脂肪组织冻存液，以满足目前冻存脂肪组织的需求。

中国专利申请CN 106719600A公开了一种脂肪组织冻存液，该冻存液由二甲基亚砜10～20％、含非必需氨基酸的基础培养基65～90％和右旋糖酐1～20％和0.5～1.5g/ml的海藻糖组成，通过将预处理过的脂肪组织放入冻存液的冻存管内制成冻存样品，然后将所述冻存样品放入程序降温盒中，再将所述程序降温盒放入-80℃冰箱内，24h后将所述冻存样品转入液氮，完成冻存。该发明能为脂肪组织提供良好的环境和充足的营养，对脂肪组织的冻存效果好，并能实现长时间的冻存，但是该方案中添加了DMSO，存在严重的毒性作用，与蛋白质疏水集团发生作用，可导致蛋白质变性。本发明没有添加DMSO，消除了脂肪组织毒性的危险性，并且能达到对比例2中所实现的技术效果。

中国专利申请CN 106465710A公开了脂肪组织冻存液及脂肪组织冻存方法，该冻存液由由4％～6％的二甲基亚砜(DMSO)、0.5％～10％的羟乙基淀粉以及10％～20％的人血白蛋白组成，将脂肪组织样本清洗后移入装有缓冲液的离心管中离心，然后将脂肪组织移至新的离心管内并剪成碎块，加缓冲液并离心，最后将脂肪组织移出并与预冷的脂肪组织冻存液混合得到混合液，将所述混合液冷冻后移入液氮中保存。该发明方法简便易操作，制作成本较低，制备的脂肪组织具有良好的活性，但是该发明中添加了DMSO和人血白蛋白，除了增加了脂肪组织的毒性外，还容易造成病原微生物的污染，并引起排异反应，不利于脂肪组织的保存。本发明没有添加DMSO和人血白蛋白，能在排除毒性和污染危险的情况下，保存出具有良好的活性、细胞特异性的脂肪组织细胞，达到甚至优于上述发明的技术效果。

发明内容

为解决现有技术中存在的缺点和不足，本发明的主要目的在于提供一种脂肪组织冻存液及其制备方法，该冻存液中没有添加血清，避免了病原微生物的污染和排异反应的发生，且没有添加具有强烈毒性的DMSO，避免了培养出具有毒性的脂肪组织。该方法对脂肪组织的冻存效果好，能长时间保存，制备方法简单易操作，为该领域的研究和发展提供了新的思路。

为了达到上述目的，本发明通过以下技术方案实现：

本发明提供一种脂肪组织冻存液，其特征在于，包括DMEM培养基、蔗糖、丙二醇、脯氨酸、四氢甲基嘧啶、超氧化歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、生育酚。