[发明专利]胃蛋白酶原Ⅱ检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种胃蛋白酶原Ⅱ检测试剂盒，包括包被有胃蛋白酶原Ⅱ单克隆抗体的磁微粒，含有辣根过氧化物酶（HRP）标记胃蛋白酶原Ⅱ单克隆抗体的酶稀释液，含有胃蛋白酶原Ⅱ抗原的校准品及样品稀释液；所述样品稀释液中含有阻断剂成分；所述阻断剂为一种或多种中和HAMA干扰的人抗鼠抗体。本发明的优点在于将高灵敏度的化学发光技术和磁微粒制备技术相结合，配套使用AutoLumo全自动检测分析仪，实现了检测全自动化；同时在样品稀释液中添加了阻断剂成分，可消除样本中嗜异性抗体，大大提高了试剂盒的抗干扰能力。

技术领域

本发明涉及生物检测技术，尤其是涉及一种胃蛋白酶原Ⅱ检测试剂盒。

背景技术

胃蛋白酶原(PG)是胃液中胃蛋白酶(蛋白水解酶)的无活性前体，为由375个氨基酸组成的蛋白多肽链，平均相对分子质量为42000 Da，人胃黏膜中有7组胃蛋白酶同工酶原。 根据生化性质、免疫原性、细胞来源及组织内分布可分为胃蛋白酶原Ⅰ（PGⅠ）、胃蛋白酶原Ⅱ（PGⅡ）两个亚群，1-5组分免疫原性近似，称为PGⅠ，主要由胃底腺的主细胞的黏液颈细胞分泌；组分6-7被称为PGⅡ，除由胃体和胃底粘膜的泌酸腺的主细胞分泌外，泌酸腺的黏液颈细胞、贲门腺和胃窦的幽门腺的黏液细胞以及十二指肠上段的Brunner腺也能产生PGⅡ，胃黏膜合成的PGⅡ约为总量的25％。胃几乎是PG的惟一来源，合成后的PG大部分进入胃腔，在酸性胃液作用下活化成胃蛋白酶原，只有少量PG(约1％)透过胃黏膜毛细血管进入血液循环，故血清PGⅠ和 PGⅡ反映了胃黏膜不同部位的分泌功能。当胃黏膜发生病理变化时，血清PG含量也随之发生改变。胃液和血清PG水平与活组织病理变化结果常一致，因此，监测血清中PG的浓度可以作为监测胃黏膜状态的手段。胃底腺黏膜萎缩的过程中，分泌PGⅠ的主细胞减少，幽门腺细胞增多，从而造成PGⅠ和PGⅡ的比值降低。因此PGⅠ和PGⅡ的比值可以作为胃底腺黏膜萎缩的指征，免疫学方法检测PGⅠ和PGⅡ水平并结合PGⅠ和PGⅡ的比值可用于筛查胃底腺黏膜萎缩性疾病，如胃炎、胃癌等等有关。

现有技术中，PGⅡ的检测方法包括酶联免疫吸附测定(ELISA)、免疫比浊法、 化学发光免疫分析法(CLIA)等。酶联免疫吸附测定方法操作过程复杂，测定时间较长，影响因素多，且不适合急诊样本的检测；免疫比浊法测定，抗原或抗体量过大时，可出现可溶性复合物，造成误差，易受脂血影响。化学发光免疫分析法虽具有反应时间短等多项优点，但抗干扰等性能较低，这是由于目前免疫检测试剂盒所用的抗体大多数来源于实验动物，嗜异性抗体可与多种动物的免疫球蛋白的Fc和Fab表位发生非特异性结合，从而干扰检测结果出现假阳或漏检。

发明内容

本发明的目的在于提供一种胃蛋白酶原Ⅱ检测试剂盒，可大大提高其抗干扰能力。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

本发明所述的胃蛋白酶原Ⅱ检测试剂盒，包括包被有胃蛋白酶原Ⅱ单克隆抗体的磁微粒，含有辣根过氧化物酶（HRP）标记胃蛋白酶原Ⅱ单克隆抗体的酶稀释液，含有胃蛋白酶原Ⅱ抗原的校准品及样品稀释液；所述样品稀释液中含有阻断剂成分；所述阻断剂为一种或多种中和HAMA干扰的人抗鼠抗体。

所述样品稀释液的配方组成为缓冲液0.01~0.2 mol/L，防腐剂0.1%~0.5%（w/v），保护蛋白1%~10%（w/v），EDTA 1%~10%（w/v），阻断剂200~500 ng/mL，色素0.001%（g/v）。

所述EDTA为乙二胺四乙酸二钠或/和乙二胺四乙酸二钾。

本发明中包被有胃蛋白酶原Ⅱ单克隆抗体的磁微粒，含有辣根过氧化物酶标记胃蛋白酶原Ⅱ单克隆抗体的酶稀释液，含有胃蛋白酶原Ⅱ抗原的校准品及样品稀释液四个组分中所用的稀释液为PBS、MES、MOPS中的任一种，其pH=6.0～8.0。

所述稀释液中的保护蛋白为牛血清白蛋白、牛血清、酪蛋白中的一种或两种。所述稀释液中的防腐剂为P300、Bro、MIT、NaN₃的任意组合。