[发明专利]一种泰山四叶参微种根的培养方法

权利要求书

1.一种泰山四叶参微种根的培养方法，其特征在于，具体步骤如下：

（1）材料选取 从泰山四叶参组培苗中选择生长健壮、至少具1个节、茎秆粗壮，茎段基部直径0.2 cm以上，高度1 cm以上，且具完整叶片的单株无菌瓶苗为试验材料；

（2）无菌微根茎的诱导 将第一步中选取的材料泰山四叶参无菌瓶苗，基部向下，扦插在无菌微根诱导培养基上，进行不定根诱导，密度瓶内株距0.5-1 cm，每株高度1-1.5 cm；在无菌微根诱导培养基上培养长到7-15 cm后，茎段基部长出白色不定根，数量1-10条，根粗0.1 cm左右；

（3）微根茎增殖

将已生出不定根的泰山四叶参无菌苗，在同一种培养基继续培养50-80 d后，白色不定根明显膨大变粗，长成直径0.3-0.8 cm左右，类似大田根茎的纺锤形、圆形或椭圆形无菌微根茎，且表面着生1-7条须根，须根根粗0.1-0.3 cm，白色，长度1-5 cm，此时，茎秆仍保持粗壮生长状态，高度4-6 cm，可继续用于下一轮微根茎培养，按剪取标准剪取培养基表面以上壮苗重复步骤1和2的培养过程，剪取后剩余部分继续在原培养基培养；

（4）微根茎的预处理

当纺锤形微根茎粗达0.3-0.5 cm，圆形或椭圆形微根茎直径达0.5-1.0 cm时即可用于移栽，移栽前，先进行预处理，按剪取标准修剪掉着生微根茎原株大部分茎叶，修剪掉的茎叶材料，可根据具体部位及需要分别用于再生扩繁或重复步骤1操作程序；

（5）微根茎移栽

修剪后剩余原株直接用于移栽，或继续存放在原培养基内等待移栽，移栽前先洗净附着在微根茎上的培养基，直接移栽于育苗盆或大田均可；

育苗盆移栽方式：将顶芽向上放在盆内，并覆土，覆土深度2-5 cm；移栽后，及时喷水，使覆土紧实；移栽后保持湿润，放在自然光照且温度不低于0-5℃的室内，此方式可全年进行；

大田移栽方式：开沟移栽，沟宽5-10 cm，深5 cm；株距10-15 cm，微根茎头部向上，斜放在沟内，并覆土，覆土深度2-5 cm，微根茎移栽后，及时喷水，使覆土紧实，大田移栽时间：4-7月；

（6）大田微根培养

微根茎移栽后保持土壤湿润，7-15 d后，开始发新芽，小苗发芽后继续培养20-30 d，可抽生5-10 cm新茎秆，此时表明，移栽的无菌微根茎已完全成活，并可正常生长；同时也表明，地下根茎长成的组培苗也已完全成活并正常生长，此时，这类型成活组培苗可同常规大田苗采取同样管理措施；

至10月底，成活大田苗地下根茎粗度可达0.5-1.0 cm，形状与大田根茎类似，只是形体大小明显小于常规大田根茎，此类型地下根茎即为大田微种根，此类型根茎可直接在大田自然越冬，并可于翌年春正常萌发新芽生长，自然越冬后所获大田微种根可同常规根茎一样作为种根进行异地运输和移栽。

2.根据权利要求1所述的一种泰山四叶参微种根的培养方法，其特征在于，无菌微根诱导培养基分为：无激素诱导培养基：为MS培养基，将接种在此培养基上的茎段培养10-15 d后，茎段基部长出白色不定根，数量3-8条，茎基根粗直径0.1 cm左右；

有激素诱导培养基：在MS培养基上加入生长调节剂IBA0.1-0.5 mg/L，接种在此培养基上的茎段培养7-15 d后，茎段基部长出不定根，数量1-10条，白色，长度0.5-3 cm，茎基根粗直径0.1 cm左右。

3.根据权利要求1所述的一种泰山四叶参微种根的培养方法，其特征在于，所述微根茎整个培育期的培养条件均为：光照培养12h/d，光照强度12000 lx，温度25℃左右。

4.根据权利要求1所述的一种泰山四叶参微种根的培养方法，其特征在于，所述步骤（3）和（4）的剪取标准为：培养基表面茎段自下而上1-1.5 cm、至少保留1对节间在原株即可。