[发明专利]一种天然细菌群体感应抑制剂的制备方法

说明书

本发明提供了一种天然细菌群体感应抑制剂的制备方法，所述的方法包括活性精油的制备及细菌群体感应抑制剂的制备。本发明从千层金植物中获得细菌群体感应抑制剂，经实验首次证实，本发明制备的千层金精油具有抑制野生紫色杆菌群体感应系统的活性，显著降低紫色杆菌素的产量，抑制生物膜的形成和群集运动，导致紫色杆菌失去致病性，而且千层金精油对紫色杆菌没有生存压力，不会导致细菌耐药性的发生，是一种基于细菌群体感应抑制作用的新型抗菌物质；本发明具有原料易得、制备方法简单可靠、抑菌剂对细菌不产生耐药性和无毒害作用等优点和特点，在细菌感染性疾病生物防治方面具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明属于生物农药技术领域，具体涉及一种天然的细菌群体感应抑制剂的制备方法。

背景技术

群体感应（Quorum Sensing, QS）的发现源于费氏弧菌（V.fescheri）的生物发光现象，是依赖细菌种群密度的一种细菌交流机制，指细菌产生并分泌特定信号分子，并通过信号分子的浓度变化来感知环境中细菌的数量变化，当信号分子浓度达到一定的阀值即可激活多种基因的表达来适应环境的变化，包括生物发光，毒力，色素，生物膜的产生，孢芽的形成。传统的抗菌药物都是以细菌的蛋白质合成、细胞壁合成、DNA 超螺旋、叶酸合成等为作用靶点，对这些重要的生命过程进行干扰破坏而致死微生物以达到治疗感染的目的，然而由于适应性和进化使得微生物极易产生耐药性和菌群失衡等。 因此，群体感应（QuorumSensing, QS）的提出为抗菌提出更加有效的方法，实现针对性阻止致病因子的表达或使其失活，使病原菌在正常增殖的条件下不产生致病性，既清除了致病因子，还不会对细菌生长产生压力而产生耐药性。

目前，已有一些从植物中分离细菌群体感应抵制剂的报道。如：穿心莲内酯可通过抑制铜绿假单胞菌毒力因子的产生而实现抗感染，呋喃酮通过群体淬灭来减弱绿脓杆菌毒力因子影响并降低了菌株抗性，姜黄中的姜黄素对尿道病原菌生物膜的产生有抑制作用。

千层金又名黄金香柳，属于桃金娘科，白千层属常绿乔木，原产于新西兰，于1999年引入我国。生长快且为优良色叶树种，可用做行道树，亦可栽植于林缘、池边、庭院，分枝性强且耐修剪，可做园林造型树种。千金层有极高的观赏价值和经济效益，枝叶可提取香气浓郁的活性精油，是珍贵的香料植物。对其详细研究发现千层金精油能够强烈抑制紫色杆菌QS系统的活性，千层金精油有望开发成以植物病原细菌QS系统为靶标的新型生物农药，防治植物细菌性病害。

发明内容

本发明旨在提供一类来源于植物的新型、环保的具有抑制细菌QS系统的抑制剂，防治细菌性病害。本发明以细菌群体感应抑制活性为追踪手段，从千层金植物中提取和制备细菌群体感应抑制剂。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种天然细菌群体感应抑制剂的制备方法，具体包括以下步骤：

（1）千层金叶片预处理：将采摘的千层金叶片洗净后晾干，置于-20℃冰箱中备用；

（2）将步骤（1）预处理过的千层金叶片置于圆底烧瓶中，按照料液质量比1：10加入蒸馏水，于精油提取器中蒸馏提取2h，提取完成后用离心管收集精油，离心后加入1g的无水硫酸钠去除多余的水分，获得具有细菌群体感应抑制活性的千层金精油；

（3）将制备出的千层金精油用甲醇-水稀释至亚致死浓度下，即获得千层金精油细菌群体感应抑制剂。

步骤（3）所述甲醇-水为甲醇和水按体积比1：100混合均匀。

步骤（3）所述亚致死浓度为5mg/mL。

进一步地，将上述制备得到的天然细菌群体感应抑制剂应用于制备抗菌先导药物中。

本发明的有益效果在于：