[发明专利]一种识别靶标蛋白CD71的方法及核酸适体的应用

说明书

本发明涉及一种识别靶标蛋白CD71的方法及核酸适体的应用，具体是在制备靶标蛋白CD71制剂以及肿瘤靶向载药制剂上的应用。本发明提供了一种新的可识别细胞表面标志性蛋白的方法，由于识别的标志性蛋白CD71在多种肿瘤细胞表面高表达，因此，该核酸适体的特异性识别CD71可以用于多种肿瘤细胞的研究。由于CD71蛋白可以被细胞内化，因此，可以将靶向CD71的核酸适体作为靶向配体，与抗肿瘤药物偶联构建靶向递送系统，来实现肿瘤的靶向性治疗。

技术领域

本发明涉及一种靶标蛋白CD71的识别方法，以及一种核酸适体在制备识别靶标蛋白CD71制剂以及肿瘤靶向载药制剂上的应用。

背景技术

核酸适体(aptamer)是一种通过SELEX(指数富集的配体系统进化)技术从随机单链寡聚核苷酸库中筛选出来的能高亲和性结合靶分子的单链DNA或RNA。适体因其结构的多样性而具有靶分子广、亲和力高、特异性强等特点，同时，相比传统抗体，适体分子量小、易改造修饰、制备方便且无免疫原性。因此，适体在基础研究、临床诊断、药物研制等方面展现了广阔的应用前景。

多数肿瘤的发生与细胞膜蛋白的改变密切相关，异常的膜蛋白可作为肿瘤诊断、治疗及预后评估的理想标记分子。然而，现在临床上广泛应用的肿瘤标志分子多为分泌蛋白，细胞表面标记分子的发现由于缺少有效技术支持仍处于初级阶段。转铁蛋白受体CD71是机体介导铁代谢的重要蛋白质分子，在铁的运输、转化和利用中起着关键作用。CD71是一种介导细胞内铁摄取和调节细胞生长相关的Ⅱ型跨膜糖蛋白。它由两个同源二聚体(180kDa)的亚基通过两条二硫键交联而成组成，每个单体(含760个氨基酸，分子量为90～95kDa)包含一个大的胞外C端区域(671个氨基酸)，一个单跨膜区域(包含28个氨基酸)及一个短的N端区域(包含61个氨基酸)。在正常细胞中，CD71的表达水平较低，由于快速生长的肿瘤细胞对铁的需求量增加，肿瘤细胞(如肝癌、黑色素瘤、胰腺癌、肺腺癌、慢性淋巴细胞性白血病和非何杰金瘤)中CD71的表达显著增加。因此，CD71是一个理想的靶标，被认为是一种有效的肿瘤标志物。我们通过一系列实验证明核酸适体TY8识别细胞的机制是通过结合细胞表面的CD71蛋白，这为肿瘤的诊断和治疗研究提供了新的方法和手段。

靶向配体在抗肿瘤药物靶向传递方面有很大的应用潜能。其对靶分子结合的选择性可赋予抗癌药物靶向特异性，同时增加药物在病变组织内的富集。目前研究比较多的配体包括抗体、多肽、小分子等。抗体通常对靶点具有高亲和力，但免疫原性高。多肽分子量小且易于合成,但多肽在体循环中易于酶解，不适合在体内应用。小分子化合物，如叶酸(folic acid,FA)，分子量小，稳定性好，但对肿瘤靶向性不高，因为肾近端小管和脑血管脉络丛同样有高表达的叶酸受体。和这些配体相比，核酸适体可体外合成且易于修饰，因其带负电荷，在体循环中很少参加非特异性相互作用。同时，它们能高亲和力高特异性地结合靶分子，分子量小，使其具有很高的组织穿透性。由于CD71蛋白在很多肿瘤细胞表面都高表达而且可以连续被细胞内化，因此，我们将特异性结合CD71的核酸适体TY8作为靶向配体，与化疗药物偶联构建靶向递送系统，来实现肿瘤的靶向性治疗。

发明内容

本发明的目的是旨在克服现有的技术不足，提供一种识别靶标蛋白CD71的方法，以及在该方法中使用的核酸适体构建识别靶标蛋白CD71制剂和靶向载药制剂的应用。

一种识别靶标蛋白CD71的方法：是利用如下序列的核酸适体进行识别：

5’-ACTCATAGGGTTAGGGGCTGCTGGCCAGATACTCAGATGGTAGGGTTACTATGAGC-3’,SEQNO.1。

所述的方法，还可以通过对核酸适体增加或者删减碱基，或者碱基替换获得具有相同功能的核酸适体。

所述的方法，还可以将所述的核酸适体连接上荧光物质、放射性物质、治疗性物质、生物素、或酶标记物质，得到与所述核酸适体具有相同结合CD71蛋白能力的核酸适体衍生物。