[发明专利]核酸检测方法有效
| 申请号： | 201811453278.9 | 申请日： | 2018-11-30 |
| 公开（公告）号： | CN109837328B | 公开（公告）日： | 2021-07-27 |
| 发明（设计）人： | 李伟;周琪;滕飞 | 申请（专利权）人： | 中国科学院动物研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6844 | 分类号： | C12Q1/6844 |
| 代理公司： | 北京永新同创知识产权代理有限公司 11376 | 代理人： | 程大军;栾星明 |
| 地址： | 100101 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 核酸 检测 方法 | ||
1.一种检测生物样品中靶核酸分子的存在和/或量的非诊断方法，所述方法包括以下步骤：
(a) 使所述生物样品接触：i) Cas12b蛋白，ii) 针对所述靶核酸分子中的靶序列的gRNA，和iii) 被切割后产生可检测信号的单链DNA报告分子，从而形成反应混合物；
(b) 检测所述反应混合物中产生的可检测信号的存在和/或水平；
其中所述可检测信号的存在和/或水平代表所述靶核酸分子的存在和/或量；
其中所述Cas12b蛋白是来自Alicyclobacillus acidiphilus的AaCas12b蛋白，且其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；
其中所述单链DNA报告分子中的单链DNA不是聚鸟苷酸。
2.权利要求1的方法，所述靶核酸分子是双链DNA分子或单链DNA分子。
3.权利要求1的方法，其中所述gRNA是sgRNA。
4.权利要求3的方法，所述sgRNA包括由选自SEQ ID NO:11-66之一的核酸序列编码的支架序列。
5.权利要求4的方法，所述sgRNA包括位于支架序列3’端的间隔区序列，其与靶序列或靶序列的互补序列特异性杂交。
6.权利要求5的方法，所述间隔区序列与靶序列具有至少一个核苷酸错配。
7.权利要求1-6任一项的方法，其中所述单链DNA报告分子在两端分别包含荧光基团和相应的猝灭基团。
8.权利要求7的方法，其中所述荧光基团选自FAM、TEX、HEX、Cy3或Cy5，所述猝灭基团选自BHQ1、BHQ2、BHQ3或TAMRA。
9.权利要求1-6任一项的方法，其中所述单链DNA报告分子长度为2个- 100个核苷酸。
10.权利要求1-6任一项的方法，其中所述单链DNA报告分子为聚腺苷酸、聚胞苷酸或聚胸苷酸。
11.权利要求1-6任一项的方法，还包括在步骤(a)之前对所述生物样品中的核酸分子进行扩增的步骤。
12.权利要求11的方法，所述扩增是PCR扩增或重组酶聚合酶扩增。
13.权利要求12的方法，所述重组酶聚合酶扩增进行10分钟-60分钟。
14.权利要求1-6任一项的方法，其中在与所述生物样品接触之前，所述Cas12b蛋白已经与所述gRNA预先复合形成Cas12b-gRNA复合物。
15.权利要求1-6任一项的方法，所述步骤(a)的反应进行20分钟- 180分钟。
16.权利要求1-6任一项的方法，步骤(a)在NEBufferTM 2、NEBuffer™ 2.1或 Cutsmart® Buffer缓冲液中进行。
17.权利要求1-6任一项的方法，其中所述生物样品选自全血、血浆、血清、脑脊液、尿液、粪便、细胞或组织提取物。
18.权利要求17的方法，其中所述生物样品是提取自细胞或组织的核酸样品。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中国科学院动物研究所，未经中国科学院动物研究所许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201811453278.9/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
