[发明专利]溶瘤病毒和CAR-T联合应用针对实体肿瘤的治疗

说明书

本发明公开了溶瘤病毒和CAR‑T联合应用技术，主要针对实体肿瘤的治疗。本发明将CAR‑T作为溶瘤病毒治疗实体肿瘤的载体，将溶瘤病毒携带到实体肿瘤部位，既克服了CAR‑T针对实体肿瘤杀伤效果不理想的弊端，又使得溶瘤病毒不单独暴露于体液免疫环境中，根据CAR‑T所针对的实体肿瘤靶点，将溶瘤病毒特异性运载并投递到实体肿瘤部位，充分发挥溶瘤病毒的裂解癌变细胞的能力和CAR‑T细胞特异性杀伤靶细胞的能力。

技术领域

本发明涉及基因工程和靶向免疫技术领域，具体涉及溶瘤病毒和CAR-T联合应用针对实体肿瘤治疗的技术

背景技术

CAR-T细胞全称为嵌合抗原受体T细胞(ChimericAntigen Receptor T-Cell)。就是将来源于患者外周血的T细胞通过慢病毒转染等手段使其表达靶向特异性靶点的单链抗体，特异性靶向靶细胞。而对非靶蛋白表达的细胞不具有识别和杀伤能力。目前嵌合抗原受体T细胞免疫疗法(Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy，CAR-TImmunotherapy)在癌症治疗方面尤其是血液型肿瘤治疗取得了巨大的成就，其特点是通过基因改造使T细胞具有靶向肿瘤细胞的能力，从而快速找出并结合靶细胞，对靶细胞造成杀伤[6^,7]。目前多个产品已经批准上市，进入临床治疗应用阶段^[8-10]，例如在B型急性白血病等血液肿瘤的治疗的诺华公司首款首款CAR-T疗法CTL019。

虽然CAR-T疗法在血液肿瘤治疗中比较成熟，但在实体肿瘤治疗方面仍然比较乏力。主要是因为实体肿瘤复杂的肿瘤微环境：缺氧、致密的包被、PD-1免疫监测点的表达、Treg细胞聚集等多种不利于T细胞的存活、渗透和杀伤。

溶瘤病毒为基因改造过的病毒，其只在癌细胞内有快速复制能力，在正常细胞里不能进行复制增殖，从而特异性的裂解杀伤癌变细胞。虽然其基因进行过改造编辑，减少了溶瘤病毒的免疫原性，但暴露于体液中终归还是会少量引起免疫反应，或进入正常细胞复制能力受到抑制使其逐渐丧失活性。所以现阶段溶瘤病毒应用与癌症治疗主要为原位注射给药法，如美国的T-VEC溶瘤病毒产品已经由FDA批准上市，是肿瘤部位原位注射给药的针对晚期黑色素瘤的治疗。

实体肿瘤占据肿瘤发生的绝大多数，所以仍需开发新的针对实体肿瘤的治疗方案^[11]。

发明内容

针对现有技术中单纯的CAR-T细胞治疗针对实体肿瘤效果不理想，而单纯溶瘤病毒给药治疗时缺少靶向性和易引起体内免疫反应的缺点，鉴于经基因改造过的溶瘤病毒在肿瘤细胞中的裂解杀伤能力以及对正常组织细胞功能活性的低影响或不影响，我们提出溶瘤病毒与 CAR-T细胞结合的方案。

具体地，本发明提供了以下技术方案：

第一方面，本发明提供了溶瘤病毒和CAR-T联合制备治疗实体肿瘤的药物的应用。

我们发现，将二者结合以后再去靶向治疗实体肿瘤，其效果远高于单独的溶瘤病毒治疗或者CAR-T治疗。

可选或优选的，所述溶瘤病毒选自HSV-1型溶瘤病毒、由HSV-1不同毒株构建的溶瘤病毒、基于牛痘病毒不同毒株构建的溶瘤病毒、或基于水泡型口炎病毒不同毒株改造的溶瘤病毒。

HSV-1型溶瘤病毒全称为1型单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus type1,HSV-1)，为双链DNA病毒，其基因组中特定基因删除可以提高其特异性在肿瘤细胞中复制的能力并减弱对正常细胞的影响。