[发明专利]QX型IBV的细胞适应株MJ在制备全病毒抗原ELISA检测试剂盒中的应用及试剂盒

权利要求书

1.一种灭活的QX型IBV的细胞适应株MJ在制备全病毒抗原ELISA检测试剂盒中的应用，所述QX型IBV的细胞适应株MJ的保藏编号为CGMCCNo.14681；

所述QX型IBV的细胞适应株MJ的灭活方法为β-丙内酯灭活法；

按照β-丙内酯与病毒上清液体积比1:1000的比例加入β-丙内酯。

2.一种QX型IBV的全病毒抗原间接ELISA检测试剂盒，包括以下组分：

包被有灭活的细胞适应株MJ的检测板；所述细胞适应株MJ的保藏编号为CGMCCNo.14681；所述QX型IBV的细胞适应株MJ的灭活方法为β-丙内酯灭活法；按照β-丙内酯与病毒上清液体积比1:1000的比例加入β-丙内酯；

包被缓冲液；

抗体稀释液；

洗涤液；

标准阳性血清；

标准阴性血清；

酶标二抗；

显色液；

终止液。

3.根据权利要求2所述全病毒抗原间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，

所述包被缓冲液为pH值为9.6的碳酸盐缓冲液；

所述抗体稀释液为质量体积浓度1％～5％脱脂奶的PBS缓冲液；

所述洗涤液为体积浓度0.05～0.2％吐温-20的PBS缓冲液；

所述标准阳性血清为抗QX型IBV株和M41毒株的SPF鸡血清；

所述标准阴性血清为7日龄阴性SPF鸡血清；

所述酶标二抗为HRP标记的羊抗鸡IgG抗体；

所述显色液为TMB底物显色液；

所述终止液为2mol/L硫酸溶液。

4.根据权利要求2所述全病毒抗原间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，灭活的细胞适应株MJ的包被浓度为100～300μg/mL。

5.根据权利要求2～4任意一项所述全病毒抗原间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述包被灭活的细胞适应株MJ的检测板制备方法如下：

(1)制备灭活的全病毒抗原：将细胞适应株MJ接种Vero细胞，培养后收集上清液；对所得上清液灭活，得到灭活的细胞适应株MJ；

(2)将灭活的细胞适应株MJ按照100μL/孔添加到检测板的孔中，35～38℃孵育2h，弃去剩余灭活的细胞适应株MJ，洗涤液洗涤2～4次，加入封闭液在37℃下孵育1h，洗涤液洗涤2～4次，即得包被有灭活的细胞适应株MJ的检测板。

6.根据权利要求3所述全病毒抗原间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述QX型IBV株为IBYZ分离株，保藏编号为CGMCC No.14682。

7.根据权利要求6所述全病毒抗原间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述标准阳性血清的制备方法包括：

将M41毒株与IBYZ分离株均以10⁴EID 50/只的浓度免疫1日龄SPF雏鸡，14日龄时重复上述步骤再次免疫，30日龄时分离该SPF雏鸡的血清，得到标准阳性血清。

8.根据权利要求3、6或7所述全病毒抗原间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述标准阳性血清和标准阴性血清的稀释度独立地为1:50～400。