[发明专利]一种快速鉴定甘薯基因组大小的方法及其应用

权利要求书

1.一种快速鉴定甘薯基因组大小的方法，包括以下步骤：

1)田间取健康的带未展开叶的甘薯茎尖组织扦插于霍格兰培养液中培养20～28h；

2)取所述培养后的茎尖组织的未展开叶或新生根尖与甘薯专用裂解液混合进行组织裂解获得裂解后的料液；

3)过滤所述裂解后的料液，收集滤液，离心，收集固相组分为裂解后的细胞；

4)将所述裂解后的细胞与染液混合染色，涡旋振荡获得待检细胞液；

5)将所述待检细胞液通过流式细胞仪，收集5000～12000个事件，检测所述待检细胞液的FL2-A值；

6)根据所述待检细胞液的FL2-A值，计算获得所述待检细胞的基因组1C值；所述待检细胞的基因组1C值＝(待检细胞液的FL2-A值/参考细胞FL2-A值)*参考细胞基因组的1C值；

所述参考细胞为三裂叶野牵牛细胞；所述三裂叶野牵牛细胞的1C＝0.4683pg；所述参考细胞FL2-A值的测定方法与所述待检细胞液的FL2-A值的测定方法一致；

所述待检细胞基因组大小＝所述待检细胞基因组的1C值*978Mb；

所述裂解液中包括10mmol/LMgSO₄、50mmol/L KCl、5mmol/L 4-羟乙基哌嗪乙磺酸、3mmol/L二硫苏糖醇、体积百分含量为0.25％的Triton X-100、体积百分含量0.1％的PVP；所述裂解液的pH值为8。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中所述组织裂解的温度为2～6℃，所述组织裂解的时间为50～70min。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤2)中所述未展开叶或新生根尖与裂解液的质量体积比为(40～60mg)：(550～650)μl。

4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述茎尖或新生根尖与裂解液混合后、组织裂解前，还包括将所述未展开叶或新生根尖的切碎至0.1*0.1mm的碎片。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述健康的甘薯茎尖组织的长度为8～12cm；所述健康的甘薯茎尖组织远离茎尖端4～6cm扦插入所述霍格兰培养液中。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)中所述过滤用滤网的孔径为300～500目。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)中所述离心的转速为800～1200rpm，所述离心的时间为6～10min。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4)中所述染色在避光条件下进行，所述染色的温度为3～5℃，所述染色的时间为12～18min。

9.权利要求1～8任意一项所述快速鉴定甘薯基因组大小的方法在DNA倍性鉴定以及细胞周期分析中的应用。