[发明专利]一种用于定性检测人宫颈脱落细胞中HPV感染的试剂盒

说明书

本发明涉及一种用于检测人宫颈脱落细胞中人乳头瘤病毒核酸的试剂盒，包括用于检测HPV6、11、16、18、26、31、33、35、39、40、42、43、44、45、51、52、53、54、56、58、59、61、66、68、70、72、73、81、82、89、83、67、55、84、34型等35个型别的一个或多个型别的检测试剂。使用本发明的试剂盒可在同一个反应条件下同时对35个与HPV病毒相关基因的型别进行高通量检测。检测的特异性强，灵敏度高，最低检测限为1ng/μL，用时短，从标本送检到得出结果可在2小时以内完成。

技术领域

本发明涉及人乳头瘤病毒(Human papillomavirus，HPV)核酸检测领域，更特别地，涉及一种用于定性检测人宫颈脱落细胞中HPV感染的试剂盒。

背景技术

人类乳头瘤病毒(human papillomaviruses，HPV)感染与人类多种肿瘤特别是宫颈癌的发生、发展密切有关。而宫颈癌为女性最常见的癌症之一，其发病率仅次于乳腺癌。全球每年新发病例约40万且有超过20万妇女死于该病。在发展中国家，由于宫颈癌筛查工作的不完善，其发生率是发达国家的6倍。近年，年轻宫颈癌患者有明显上升趋势，发病以每年2％～3％速度增长，对妇女的身心健康造成极大的危害。因此，对宫颈癌进行早期筛查的一项重要内容就是对HPV的检测。

HPV是一种具有种属特异性的嗜上皮病毒，属双链闭环的小DNA病毒。人类是HPV的唯一宿主，它定向感染人体皮肤及粘膜的复层鳞状上皮内，具有高度的宿主特异亲和力。

国际癌症研究中心(IARC)专题讨论会(1995年)明确提出，HPV感染是宫颈癌的主要病因。目前鉴定出HPV亚型100余种，其中30余种与宫颈感染和病变有关，根据其致病力的大小分为高危型和低危型两种：将HPV6、11、40、42等归为低危型，主要引起生殖道、肛周皮肤和阴道下部的外生殖性湿疣类病变、扁平湿疣类病变和低度子宫颈上皮内瘤变(CINI)；高危型主要为HPV 16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、73、82等，主要导致高度子宫颈上皮内瘤变(CINII、CINIII)和宫颈癌的发生在，，尤其是HPV16和18型。全球范围的研究结果显示，在99.7％的宫颈癌患者体内检测到高危型人乳头瘤病毒DNA的存其中HPV16、18、31、45型的感染占80％。因此，检测出样本中的具体HPV亚型对于宫颈癌的防治具有重要的指导意义。

长期以来，细胞学筛查是宫颈癌筛查的唯一或主要方式，近年来，HPV感染的检查方法也由组织细胞水平发展到分子水平。

目前国内临床主要的HPV检测的常见方法包括测序法、杂交捕获法、基因芯片法及荧光PCR法。测序法的结果相对准确，但操作繁琐。杂交捕获法如Digene公司的HybridCaptureII已在临床上应用，但检测时间长，一次实验一般要5-6小时、灵敏度低、操作复杂、检测基因型少且需要特定昂贵的仪器，成本高，也不适用于临床。

荧光定量PCR(FQ-PCR)在常规PCR的基础上把基因扩增、分子杂交和光化学融为一体，使PCR扩增和产物分析的全过程在单管封闭条件下进行，实现了实时动态检测和结果自动化分析，从根本上解决了扩增产物污染和不能定量的问题。该方法通过探针杂交进一步提高了HPV DNA检测的特异性，具有快速、简便、灵敏度高、特异性强等优点，成本适中，几乎不会造成污染，适用于临床工作和大规模筛查。然而，目前该方法主要针对HPV6、11、16和18感染，易漏诊其他HPV亚型，也不能明确区分多种型别。

因此，临床上需要一种能一次性快速、准确检测多种常见型别的HPV试剂盒。

发明内容