[发明专利]一种鸡MH7基因CNV标记辅助选育产蛋量的方法

权利要求书

1.一种鸡MH7基因CNV标记辅助选育鸡产蛋性状优良品种的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)提取待测鸡的基因组DNA；

(2)以上述提取的鸡基因组DNA为模板，利用目标基因引物对P1和参照基因引物对P2，分别进行实时荧光定量PCR扩增反应；

(3)根据实时荧光定量PCR扩增结果，计算出待测鸡MH7基因CNV标记片段拷贝数，判断拷贝数变异类型，并进行鸡MH7基因不同拷贝数与产蛋量相关性分析，根据拷贝数变异类型进行鸡产蛋性状的CNV标记辅助选育；

所述目标基因引物对P1为：

上游引物F1：GGAGCACTGGAGGGTCAGAAA；

下游引物R1：TCTGCAGCTGGCTGAGAAGATT；

所述参照基因引物对P2为：

上游引物F2：TCACAGCCACACAGAAGACG；

下游引物R2：ACTTTCCCCACAGCCTTAGC；

在步骤(3)，所述待测鸡MH7基因CNV标记片段拷贝数利用2^-ΔΔCt方法进行计算；

在步骤(3)，所述拷贝数变异类型的判断方法为：根据公式Log₂2^-ΔΔCt将拷贝数定量结果分为三类：当-0.5≤Log₂2^-ΔΔCt≤0.5时，待测鸡的拷贝数变异类型属于正常型，即拷贝数正常；当Log₂2^-ΔΔCt-0.5时，待测鸡的拷贝数变异类型属于缺失型，即拷贝数缺失；当Log₂2^-ΔΔCt0.5时，待测鸡的拷贝数变异类型属于插入型，即拷贝数插入；通过鸡产蛋量与MH7拷贝数变异的关联性分析，缺失型个体的产蛋量显著高于正常型和插入型的个体；

在步骤(3)，所述CNV标记位于鸡MH7基因GenBank序列号为NC_006127.5所示序列的67422648bp-67425461bp、67440358bp-67443254bp和67466738bp-67478256bp重复区域内。

2.根据权利要求1所述的一种鸡MH7基因CNV标记辅助选育鸡产蛋性状优良品种的方法，其特征在于：在步骤(2)，所述实时荧光定量PCR所用的PCR扩增体系以20μL计为：10ng/μL模板DNA1μL、10μmol/L的上下游引物各1μL、2xSYBR Green Master10μL、ddH₂O7μL。

3.根据权利要求1所述的一种鸡MH7基因CNV标记辅助选育鸡产蛋性状优良品种的方法，其特征在于：在步骤(2)，所述实时荧光定量PCR扩增反应的程序为：①预变性95℃，10min；②扩增反应：95℃变性10s，60℃退火30s，39个循环；③绘制熔解曲线：95℃5s，65℃1min。

4.根据权利要求1所述的一种鸡MH7基因CNV标记辅助选育鸡产蛋性状优良品种的方法，其特征在于：在步骤(2)，进行实时荧光定量PCR扩增时，每个基因引物对做3个重复。