[发明专利]一种从昆虫材料中提取DNA的提取剂及其应用

说明书

本发明公开了一种用于DNA提取的提取剂及其应用。该用于DNA提取的提取剂由Tris‑base，NaCl，PVP和Tween‑20组成，可快速提取微量昆虫材料DNA，且样品提取过程中仅需配置该提取剂即可，不需要配置其他液体。本发明提取剂所采用的试剂均为实验室常用化学试剂，成本低廉，节约成本；且提取剂成分稳定，不需现用现配，可反复使用，常温保存至少3个月。同时本发明提取微量昆虫样本DNA过程操作简便、快速，可以在30s内完成提取。本发明提取的DNA质量稳定，直接可以用于后续实验检测。此方法最大优点为仅使用一种提取液，提取过程可以在30s内完成，DNA提取质量稳定，可以直接应用于后续实验检测。

技术领域

本发明专利涉及生物技术领域，特别涉及一种用于昆虫微量DNA提取的提取剂及其应用。

背景技术

随着现代分子生物学、信息学的发展，基于DNA的各种基因检测技术发展迅速，如专一性等位基因PCR扩增(allele specific amplification,ASA)、限制性片段长度多态性分析(Restrietion fragment length polymorphism,RFLP),PCR单链/双链构象多态性(single/double strand conformation polymorphism,SSCP)、随机扩增多态性DNA技术(randomly amplified polymorphic DNA,RAPD)、环介导等温扩增技术(Loop-mediatedisothermal amplification，LAMP)等，广泛应用于昆虫种类识别鉴定、抗药性水平监测、昆虫生物学特性研究等领域，为我国保护昆虫生物性多样性、有害昆虫科学治理、有益昆虫合理利用提供重要的理论依据。而昆虫样本DNA提取方法是实现这些检测技术应用的一个重要条件。从发展趋势上看，更简单快速、特异性更高、更经济实用的DNA提取方法是必要趋势，具有广阔的应用前景。传统的DNA方法有很多，比如传统经典的酚氯仿方法等，这些方法获得的DNA纯度很高，能够满足各种试验的要求，但操作繁琐，用时长，且所用试剂具有一定的毒性。比如盐提取方法，产率相对较低，纯度较差。如硅胶膜吸附柱法、磁珠法等，需反复洗脱，操作相对依然复杂。国内外生物公司也开发了多种商品化的核酸DNA提取试剂盒，也有公司开发出快速微量DNA方法，但仍然存在普遍操作较复杂、需要时间长、样本需要较多、提取结果不稳定等问题。因此需要一种快速、简便、经济且稳定的DNA方法，以推动上述检测技术更简单化的应用。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种用于昆虫微量样本DNA提取的提取剂及其使用方法和应用。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

一种用于DNA提取的提取剂，是由下述组分组成的缓冲液：

所述缓冲液的pH为8.0，溶剂为蒸馏水。

所述聚乙烯吡咯烷酮(PVP)优选为聚乙烯吡咯烷酮K 40(PVP K-40)。

在本发明的一个优选的技术方案中，所述Tris-base的浓度为25mM。

在本发明的另一个优选的技术方案中，所述NaCl的浓度为150mM。

在本发明的再一个优选的技术方案中，所述聚乙烯吡咯烷酮的浓度为0.02g/ml。

上述的提取剂在用于微量昆虫样本的DNA提取中的应用也属于本发明的保护范围。

所述应用中，所述微量昆虫样本是指昆虫样品重量为0.1-10mg。

本发明还提供一种提取昆虫样本DNA的方法，是利用上述的提取剂提取昆虫样本DNA。

所述方法中，所述昆虫样本量为0.1-10mg。

在本发明的一个实施方式中，所述方法包括下述步骤：