[发明专利]一种脱除甜瓜种子中黄瓜花叶病毒的方法

说明书

本发明涉及一种脱除甜瓜种子中黄瓜花叶病毒的方法，属种子处理技术领域。具体通过以下步骤完成：（1）干热处理，（2）药剂处理，（3）滤种，（4）漂洗，（5）烘干，（6）病毒检测。该方法克服了现有技术的不足，利用本发明提供的方法不仅提高了甜瓜种子的发芽率及发芽势，而且对甜瓜种子中黄瓜花叶病毒的脱除更为彻底，种子和种苗脱除率分别达到98.07%和100%。另外利用本发明提供的实时荧光定量PCR检测方法对脱毒效果进行评价，能够精确掌握脱毒种子中病毒的含量，从而在保证种子高品质的前提下，准确控制钝化病毒的技术指标，做到最大限度地抑制病毒活性。本发明提供的甜瓜种子脱毒方法不受时间限制、环境的影响，可常年在实验室或基层单位使用，非常实用，可用于脱毒甜瓜种子的规模化生产。

技术领域

本发明涉及种子处理技术领域，具体涉及一种脱除甜瓜种子中黄瓜花叶病毒方法。

背景技术

甜瓜味甜色美，品质独特，素有“瓜中之王”的美称，是享誉国内外的名优特产。病毒病是当前甜瓜生产中的首要病害，发生普遍、流行严重，造成甜瓜含糖量降低，品质低劣，经济效益下降，很大程度上制约了甜瓜产业的发展。黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus，CMV）是雀麦花叶病毒科（Bromoviridae）黄瓜花叶病毒属（Cucumovirus）的典型成员，其寄主广泛，能侵染85科、365属、1000种以上的单、双子叶植物，是目前世界范围内发生最普遍、分布最广、危害最严重的植物病毒之一。CMV是典型的种传病毒，携带病毒的种子不仅形成带毒幼苗作为病毒病发生的初侵染源，再经昆虫媒介的二次传播形成发病中心，引发病毒病大面积爆发；同时还随种质资源交流远距离传播扩散，对病毒病的发生、传播、危害影响极大。因此对种子进行脱毒和无害化处理，从源头上杜绝病原，是有效控制和预防甜瓜病毒病大发生，从而减少经济损失的重要环节。

研究表明，采用干热处理、温汤浸种、辐照、化学药剂等种子处理技术能在一定程度上脱除、钝化种子携带的病毒，有效降低种子带毒率。目前对辣椒等种子中的黄瓜花叶病毒（CMV）所研发的脱毒处理研究和应用有见报道，但未见针对甜瓜种子中CMV的脱毒方法。由于不同植物种子对高温、化学药剂等的耐受性均有较大差异，种子脱毒处理工艺直接影响脱毒效果、种子质量及寿命，操作稍有不慎，会导致种子发芽率和发芽势降低，或失去活力。因此在种子脱毒处理中，如何精确控制钝化病毒的技术指标，做到既能最大限度地保证种子脱毒效果彻底持久，同时又能使种子保持高活力，以降低风险、确保生产安全，是一个亟待解决的难题。建立高效、灵敏的病毒检测方法，制定安全高效的种子脱毒技术指标是解决这一难题的关键。

目前常用的种子脱毒效果的检测方法主要有苗期症状观察、指示植物法、酶联免疫法、免疫电镜法和RT-PCR技术，这些方法虽然能够对脱毒效果进行评价，但存在着稳定性差、只能定性检测、灵敏度有限等缺点，不能对病毒进行精确定量，难以确定种子脱毒处理措施对病毒数量和活性的影响，因此无法精确控制钝化病毒的技术指标，难以避免病毒脱除效果不佳，或种子中的病毒虽被脱除，但种子的品质却严重下降的现象。近年发展起来的实时荧光定量PCR技术，与上述检测方法相比，该法具有更加灵敏、简便、高效、稳定和定量化等优点。尤其是其可定量的特点应用于种子脱毒效果的检测中，能够精确掌握脱毒种子中病毒的含量，从而在保证种子高品质的前提下，准确控制钝化病毒的技术指标，做到最大限度地抑制病毒活性。目前尚未见利用实时荧光定量PCR技术进行甜瓜种子脱毒效果评价的报道。

发明内容

本发明的目的在于克服现有甜瓜种子脱毒方法的不足和缺陷，针对甜瓜种子中携带的主要病毒CMV，提供一种甜瓜种子高效、安全脱毒的方法，同时利用实时荧光定量PCR检测方法对脱毒效果进行评价，做到既能最大限度地抑制病毒活性，又不降低种子的发芽和活力，为甜瓜病毒病的防治和无毒种苗的繁育提供技术支持。

本发明为实现上述目的所采用的技术方案是：针对甜瓜种子携带的主要病毒CMV，提供一种甜瓜种子脱毒方法，具体步骤如下。