[发明专利]一种评价医用交联透明质酸钠凝胶在体内降解周期的方法

说明书

本发明公开了一种评价医用交联透明质酸钠凝胶在体内降解周期的方法。本发明具有如下步骤：(1)交联透明质酸钠凝胶用含底物荧光素的透析液透析溶胀；(2)将溶胀完成的交联透明质酸钠凝胶制成凝胶颗粒；(3)凝胶颗粒，用预灌封注射器灌装、灭菌，得到交联透明质酸钠凝胶注射剂，注射于动物体皮下部位；(4)将可持续表达荧光蛋白的细胞注射至动物体腹腔部位，通过活体成像仪器观察出现荧光的细胞情况，从而评价注射的交联透明质酸钠凝胶在体内的降解周期。本发明具有数据真实准确、方法科学可行等优点。

技术领域

本发明属于生物降解技术领域，特别是涉及一种评价医用交联透明质酸钠凝胶在体内降解周期的方法。

背景技术

透明质酸类产品是目前最流行的可吸收皮肤填充剂，作为一种生理活性物质，广泛分布在动物和人体结缔组织细胞外基质中。他在溶液中无规则转曲状态和它的流体动力学特性，赋予其某些重要的物理特性如高粘弹性，可塑性，独特的流变学特性以及良好的生物相容性。正因为如此，它是一种用途广泛的可吸收生物材料。随着科技发展，玻璃酸钠的交联技术也日益提高，通过交联可获得不同分子量大小和不同结构的交联玻璃酸钠，他们的性状如粘弹性，降解时间等也各不相同，根据这些特性，适应症和具体用途也各不相同。

在新产品开发过程中，一般是通过体外酶解的方式来评价透明质酸的交联度，从而间接反映该产品的降解周期，推断临床应用上的维持时间，但这种方法受到诸多因素影响，如体外酶解实验凝胶颗粒的分散状态和实际临床应用中凝胶颗粒的状态、模拟酶解条件中酶浓度和人体类实际酶浓度等都会影响最终结果的判断，且两种方法之间的关联性无法得到很好的认证。另外一种是采用动物皮下植入的方式，传统的动物实验方法需要在不同的时间点宰杀实验动物以获得数据，得到多个时间点的实验结果，动物的个体差异以及目视法评估的方法(尤其是降解后期)均对实验结果的判断存在一定的影响。

为了解决现有技术存在的问题，本发明开发了一种利用活体动物体内可见光成型技术原理，评价医用交联透明质酸钠凝胶在体内降解周期的方法，该方法采用体内可见光成像技术通过对同一组实验对象在不同时间点进行记录，跟踪同一观察目标(标记细胞及基因)，所得的数据也更科学、真实可信，为评价医用交联透明质酸钠凝胶在体内降解周期提供了更为科学的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种评价医用交联透明质酸钠凝胶在体内降解周期的方法。本发明具有数据真实准确、方法科学可行的优点。

为了达到上述的目的，本发明采取以下技术方案：

一种评价医用交联透明质酸钠凝胶在体内降解周期的方法，具有如下步骤：

(1)透析与溶胀：交联透明质酸钠凝胶用含底物荧光素的透析液透析，直至凝胶溶胀至所需重量；

(2)制粒：将溶胀完成的交联透明质酸钠凝胶，用筛网进行制粒得到所需粒径的交联透明质酸钠凝胶颗粒；

(3)灌装灭菌：将步骤(2)制备得到的交联透明质酸钠凝胶颗粒，用预灌封注射器灌装、灭菌，得到交联透明质酸钠凝胶注射剂，注射于动物体皮下部位；

(4)将可持续表达荧光蛋白的细胞注射至动物体腹腔部位，通过活体成像仪器观察出现荧光的细胞情况，从而评价注射的交联透明质酸钠凝胶在体内的降解周期。

在本发明的一个优选实施中，所述步骤(1)中，所述交联透明质酸钠凝胶通过如下方法制备：透明质酸钠原料用含有交联剂的氢氧化钠溶液完全溶解得到透明质酸钠凝胶，溶解完成后将凝胶制备成一定厚度的块状，在水浴内加热保温，进行交联反应。

在本发明的一个优选实施中，所述透明质酸钠原料为发酵法或鸡冠提取法制备。

在本发明的一个优选实施中，所述氢氧化钠溶液的质量浓度为0.5-3.5％。

在本发明的一个优选实施中，溶解完成后的透明质酸钠质量浓度为12-24％。