[发明专利]一种含脂肪干细胞分泌物的培养基及其制备方法

说明书

本发明公开了一种含脂肪干细胞分泌物的培养基的制备方法，其包括如下步骤：1)取第三代的脂肪干细胞以1×10⁶个接种于明胶包被的细胞培养皿，待细胞贴壁后弃去上层液体，PBS洗涤三次；2)加入基础培养基培养48h，经离心后过滤，得含脂肪干细胞分泌物的培养基。本发明的培养基克服了传统的将现配含脂肪干细胞应用于细胞治疗试验过程操作不便的种种弊端，其将含脂肪干细胞分泌物与培养基相结合，实现了保存方便、可批量使用、无需临时现配、避免液氮保存需要适时复苏等，且可有效降低试验过程中细胞转移时受污染的可能性，有利于在生产实际中的应用。

技术领域

本发明涉及生物工程领域，特别涉及一种培养基及其制备方法。

背景技术

脂肪干细胞(adipose-derived stem cells，ADSCs)是脂肪组织中一类多能干细胞，其含量丰富，易于分离，供区易被患者接受，近年来作为热受追捧的间充质干细胞，在再生医学和临床工作中已受到了广泛的关注与应用。研究表明ADSCs能够增强细胞增殖、迁移的活力，提高受损细胞生命力、拮抗细胞凋亡。

现有研究表明，脂肪干细胞具有促进皮肤创面愈合的作用，也可以延缓皮肤衰老，临床上将脂肪干细胞引入到细胞治疗中已获得一定成效，然而因细胞治疗对细胞消耗量很大，且有学者甚至明确提出ADSCs具有潜在的致癌性，注射细胞并不是最理想的方法。因此如何更好地发挥脂肪干细胞在临床上的使用是目前需要解决的问题。

人皮肤成纤维细胞在皮肤生物学中发挥着十分关键的作用，不仅可以促进创面的愈合，而且在保持皮肤的完整性及年轻化的过程中也扮演着重要的角色。研究表明，ADSCs具有强大的旁分泌功能，可以产生多种生长因子，激活临近细胞或组织而产生相应的生物学作用，在抗衰老方面具有显著的作用，如可促进成纤维细胞增殖及胶原的分泌，使真皮内胶原含量增加，分泌大量新的细胞外基质成分，从而修复原有的真皮层弹性纤维断裂，重建、修复皮肤结构，达到皮肤真皮变厚、皮肤弹性增加，从而改善皮肤质地。

如何在避免直接注射脂肪干细胞所带来的潜在风险的前提下通过脂肪干细胞有效提高皮肤成纤维细胞的活性，有利于皮肤再生，成为亟需解决的一大问题。

发明内容

本发明的目的在于针对上述现有技术的不足，提供一种含脂肪干细胞分泌物的培养基的制备方法，其获得的培养基具有细胞培养基的替代作用，也有利于皮肤再生，避免直接注射脂肪干细胞所带来的潜在风险，增加了临床应用的可能性。

本发明所采取的技术方案是：一种含脂肪干细胞分泌物的培养基的制备方法，其包括如下步骤：

1)取第三代的脂肪干细胞以1×10⁶个接种于明胶包被的细胞培养皿，待细胞贴壁后弃去上层液体，PBS洗涤三次；

2)加入基础培养基培养48h，经离心后过滤，得含脂肪干细胞分泌物的培养基。

作为上述方案的进一步改进，步骤2)中所述的基础培养基按质量百分比计由10％的胎牛血清和90％的DMEM组成。

作为上述方案的进一步改进，步骤2)中所述离心的离心速度为4000rpm，离心时间为10min。

作为上述方案的进一步改进，步骤2)中所述过滤为经0.22μm过滤。

本发明的目的还在于提供一种含脂肪干细胞分泌物的培养基，其由如上所述的制备方法制备所得。

本发明的有益效果是：本发明的培养基克服了传统的将现配含脂肪干细胞应用于细胞治疗试验过程操作不便的种种弊端，其将含脂肪干细胞分泌物与培养基相结合，实现了保存方便、可批量使用、无需临时现配、避免液氮保存需要适时复苏等，且可有效降低试验过程中细胞转移时受污染的可能性，有利于在生产实际中的应用。

附图说明