[发明专利]具有提高免疫应答功效的T细胞及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种具有提高免疫应答功效的T细胞及其制备方法和应用。该具有提高免疫应答功效的T细胞通过将外源基因CD40L、4‑1BBL整合到抗原特异性T细胞染色体上过表达制备获得。该具有提高免疫应答功效的T细胞不仅自身增殖快、IFN‑γ的表达量高，关键是，还能够显著促进其周围的未携带外源基因的抗原特异性T细胞增殖、IFN‑γ表达水平，在激活周围抗原特异性T细胞免疫应答能力方面发挥着“将军”引领作用，在治疗肿瘤、慢性病毒感染、细菌感染中发挥着至关重要的应用。

技术领域

本发明涉及T细胞技术领域，特别是涉及具有提高免疫应答功效的T细胞及其制备方法和应用。

背景技术

目前用于提高机体免疫力的T细胞治疗技术包括扩增的T细胞治疗技术、CAR-T细胞治疗技术和TCR-T细胞治疗技术。第一种技术是简单大量扩增患者的特定细胞用于治疗，T细胞功能没有实质的改变。CAR-T和TCR-T细胞治疗技术是通过表达人工改造或者筛选的T细胞受体，增强对肿瘤或者病毒的识别能力，从而达到清除病毒和肿瘤的目的。这三种现存的T细胞治疗技术都不能增强未改造的体内其它免疫细胞的功能，因此对慢性病毒感染和实体瘤的治疗无效。

肿瘤可以说是当今社会影响人类健康的第一大杀手，每年几乎都会有数百万人死于癌症。目前对于肿瘤的治疗手段除了早期的手术切除，还有化疗、放疗。免疫疗法在近几年取得了突飞猛进的发展，包括免疫检查点抑制剂和细胞过继性疗法。前者主要包括PD-L1和CTLA-4抗体，后者主要指TCR-T和CAR-T技术。其中前者可以通过抑制免疫细胞的抑制性信号通路最大限度地诱导机体免疫应答，从而清除肿瘤。但是肿瘤抗原通常都是低亲和力的，即便抑制了免疫抑制信号，也很难激起很强的免疫反应，所以只是在个别肿瘤治疗中起到了一定的作用。后者中TCR-T主要是通过筛选得到具有肿瘤抗原识别能力的T细胞，然后获得T细胞的TCR序列，接着通过基因改造技术使患者来源的T细胞也表达这种能识别肿瘤抗原的TCR，最后通过体外培养获得大量细胞回输治疗患者。但是同样机体中天然存在的这种TCR对肿瘤抗原的亲和力是很低的，很难激起有效的免疫反应。CAR-T则是通过基因改造技术，将对肿瘤抗原具有高亲和力的嵌合抗原受体表达在患者的T细胞上，最后通过体外培养获得大量细胞回输治疗患者。优点是受体对抗原亲和力高，而且摆脱了MHC分子的限制性，能够直接识别肿瘤抗原，极大地提高了对肿瘤细胞的杀伤能力。缺点是可能会在患者体内引起细胞因子风暴，并且具有神经毒性。细胞因子风暴，往往表现为高热、低血压、休克等，发生率超过60％-70％，其中较为严重的细胞因子风暴的发生率，大约在20％-30％。一般需要糖皮质激素、IL-6抗体等药物进行控制。神经系统毒性，多表现为脑水肿、颅内压升高、癫痫、意识状态改变等，其发生机制目前尚不清楚，国外时不时出现患者因为CAR-T导致的神经毒性而去世的报道。而且CAR-T收费接近天价，很难在患者中普及。最重要的一点是很难找到一种只在肿瘤细胞上特异性表达的受体分子，而且针对实体瘤的治疗效果也一般，目前只有CAR-19和CAR-20在白血病患者中取得了不错的疗效。