[发明专利]鸡痘活疫苗的制备方法及其产品在审
| 申请号： | 201811469519.9 | 申请日： | 2018-12-04 |
| 公开（公告）号： | CN109908337A | 公开（公告）日： | 2019-06-21 |
| 发明（设计）人： | 孙心;杨本;刘德胜;刘鑫莹;杨大伟;李倩;陈丕坤;赵刚;李建华;毕德峰 | 申请（专利权）人： | 哈药集团生物疫苗有限公司 |
| 主分类号： | A61K39/275 | 分类号： | A61K39/275;A61K47/42;A61K9/19;A61P31/20 |
| 代理公司： | 北京思元知识产权代理事务所(普通合伙) 11598 | 代理人： | 余光军;杨惠 |
| 地址： | 150069 黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 活疫苗 鸡痘 制备 鸡胚成纤维细胞 传代 无血清培养基 悬浮 增殖培养 病毒液 病毒增殖培养 免疫保护效力 冻干保护剂 生物反应器 细胞 扩大生产 生长状态 细胞悬浮 驯化培养 痘病毒 混匀 种鸡 生产成本 接种 生长 收获 污染 生产 | ||
1.一种制备鸡痘活疫苗的方法，其特征在于，包括：(1)将鸡胚成纤维细胞进行驯化培养得到适应无血清培养基、呈单细胞悬浮生长状态的传代鸡胚成纤维细胞；(2)将步骤(1)驯化培养得到的传代鸡胚成纤维细胞接种到生物反应器或细胞培养瓶中进行细胞悬浮增殖培养；(3)向悬浮增殖培养的传代鸡胚成纤维细胞接种鸡痘病毒进行病毒增殖培养后收获病毒液；(4)将收获的病毒液与冻干保护剂混合均匀，冷冻干燥，即得鸡痘活疫苗。
2.按照权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述的适应无血清培养基、呈单细胞悬浮生长状态的传代鸡胚成纤维细胞的微生物保藏编号是：CGMCC No.16295。
3.按照权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中将经过驯化培养得到的传代鸡胚成纤维细胞按照初始密度为0.3×106cells/ml、0.5×106cells/ml或0.75×106cells/ml的接种密度接种到生物反应器或细胞培养瓶中进行悬浮培养；优选的，步骤(2)中将经过驯化培养得到的传代鸡胚成纤维细胞按照初始密度为0.75×106cells/ml的接种密度接种到生物反应器或细胞培养瓶中进行悬浮培养。
4.按照权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中将经过驯化培养得到的适应无血清培养基、呈单细胞悬浮生长状态的传代鸡胚成纤维细胞接种到生物反应器或细胞培养瓶中在搅拌条件下进行细胞悬浮增殖培养；其中，所采用的搅拌转速为50-500r/min；优选为60-120r/min；最优选为100r/min。
5.按照权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述的细胞悬浮增殖培养的条件还包括：pH值为7.2、溶氧值为50％、培养温度为37℃。
6.按照权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中向悬浮增殖培养24-60小时的细胞接种鸡痘病毒进行病毒增殖培养；优选的，步骤(3)中向悬浮增殖培养36小时的细胞接种鸡痘病毒进行病毒增殖培养。
7.按照权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，按照体积比计，按照1-10％的接毒量向细胞接种鸡痘病毒；优选的，按照6％的接毒量向细胞接种鸡痘病毒。
8.按照权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述的病毒增殖培养条件还包括：pH值为7.2、溶氧为50％、温度37℃、搅拌转速为100r/min。
9.按照权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中接种鸡痘病毒增殖培养24-120小时收获病毒液；优选的，步骤(3)接种鸡痘病毒增殖培养72小时收获病毒液。
10.按照权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中所述冻干保护剂由A液和B液组成；其中，
所述A液的组成是：明胶5g、蔗糖5g、糊精5g、胰蛋白胨2g；去离子水定容至100ml；
所述B液的组成是：维生素C0.1g、山梨醇2g、谷氨酸钠1.5g；去离子水定容至100ml。
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