[发明专利]一种沙蚕抗血栓活性物质的制备方法

说明书

本发明公开了一种沙蚕抗血栓活性物质的制备技术。通过沸水煮提法提取出抗血栓活性物质，并通过等电点沉聚法、分级醇沉法和凝胶柱层析法对活性物质进行纯化。本发明制备得到的抗血栓活性物质，不仅具有高效的抗血栓活性，而且制备过程精简，同时由于制备过程中经历了沸水煎煮和强酸碱环境下的等电点沉聚步骤，还具有优良的热稳定性和pH稳定性，便于储存和后续的抗血栓药物和保健品生产工艺的设计。本发明为源于沙蚕的抗血栓物质的制备开拓了新方法和新道路，具有良好的研究和开发利用前景。

技术领域

本发明属于海洋生物制品领域的一种沙蚕抗血栓活性物质的制备方法。

背景技术

沙蚕在分类学上属于环节动物门、多毛纲、游走目、沙蚕科，俗称海虫、海蛆、海蜈蚣、海蚂蝗，长10厘米左右，栖息泥沙中，生殖季节或夜出觅食时，能游水；沙蚕体似蠕虫，呈长椭圆柱形而稍扁，两侧对称，后端尖，整体由头部、躯干部和尾部3部分组成，头部发达，躯干部具有许多刚节，各节两侧有1对外伸的肉质扁平凸起，称为疣足，足上有刚毛，刚毛有毒腺，刺到皮肤有红肿疼痛感觉，尾部为体的末节，沙蚕在潮间带极为习见，亦见于深海，在岩岸石块下、石缝中、海藻丛间，以及珊瑚礁或软底质中均为占优势的无脊椎动物，沙蚕主要食其他蠕虫及海产小动物，沙蚕科的多数种在生殖前发生明显的形态变化，雄性的背须具齿状乳突、肛节长出特化的感觉乳突，内部变化包括肌肉的分解和重组、消化道的自融、体腔充满生殖产物，结果使虫体变化，雄性乳白色、雌性蓝绿色，沙蚕由底栖转入生殖浮游，起浮于海面排精放卵生殖后，雌雄个体大多下沉于海底死去；沙蚕是构成海洋生物食物链的主要成分之一，是鱼、虾、蟹类的上好食物，是钓取海鱼的主要饵料，更也是水产养殖界重要饵料，现中国发现沙蚕有35种，多产于我国的黄海和渤海沿岸，海南、福建、浙江、广东、山东沿海有养殖。

目前沙蚕已被人们当作美食和营养保健品利用，鲜品沙蚕放入油锅中爆炒，肉脆味丰；沙蚕晒干后，又称“龙肠干”，色金黄而透明，比鲜品更为醇美清甜，为高级宴席的珍贵名菜，沙蚕营养甚丰，有开胃明目、养肝补脾、健胃润肠之功用，成束成捆的沙蚕干作为馈赠至亲好友的贵重礼品；沿海居民还视生殖腺成熟的沙蚕为营养珍品；干制后煮汤味极鲜美，有“天然味精”之称，油炸后酥松香脆，为下酒佳肴，沙蚕无论在国内或出口都十分畅销。

沙蚕具有药用价值，在我国古代就作为药材用于身体调养和疾病治疗；根据我国医学巨著《本草纲目》记载，沙蚕具有祛风补血，延年益寿的作用；另外现代医学研究发现，沙蚕作为药材均具有溶栓的活性，并已经实现了溶栓活性成分的分离纯化；包括沙蚕溶栓蛋白酶、沙蚕金属蛋白酶、沙蚕纤溶酶和沙蚕激酶。

陈颢1999年公开从沙蚕体内提取溶血栓纤溶酶—沙蚕激酶，提供一种原料丰富、价格低廉、安全无毒、口服有效的溶栓药物。沙蚕激酶的分子量在25000-55000之间，等电点在3-7之间。

王斌 2006年公开了一种具有溶栓活性的沙蚕激酶的编码基因序列及其氨基酸序列， 从多种沙蚕的cDNA文库中克隆沙蚕激酶编码基因，通过基因重组技术，在真核表达系统或原核表达系统中获得重组表达，具有溶栓生物学活性。

李荣贵2007年报道了沙蚕溶栓活性蛋白酶，将表达裁体pMAL-PPA转化入E.coliDH5a大量表达麦芽糖结合蛋白-沙蚕溶栓活性蛋白酶(MBP-PPA),融合蛋白经Amylose-resin亲和层析与DEAE-Scpharose FF离子交换层析得到了纯化，热稳定性好，最适pH 8.0。

李琦 2008年报告了沙蚕蛋白酶及其同工酶的分离纯化工艺，应用硫酸铵盐析、凝胶过滤层析、疏水层析等技术从沙蚕体内分离得到沙蚕蛋白酶，证明:沙蚕蛋白酶具有很强的纤维蛋白原及纤维蛋白溶解活性;对凝血功能未见有影响;有显著的抑制血小板聚集作用;有显著改善血液流变学作用;有抗血栓形成作用。