[发明专利]用于检测病原体的引物组、试剂盒和检测方法

说明书

一种用于检测病原体的引物组、试剂盒和检测方法，该引物组包括至少60对引物对，每对引物对由正向引物与反向引物组成，引物对选自SEQ ID NO：1~154所示核苷酸；任选地，该引物组用于在同一反应体系中，对病原体的特异序列进行多重PCR靶向扩增。本发明的用于检测病原体的引物组，能够一次性检测至少20种靶标，特异性较强，成本显著低于基于宏基因组测序的方法，并且最快24小时得到检测结果，大大缩短了检测周期。

技术领域

本发明涉及病原微生物检测技术领域，具体涉及一种用于检测病原体的引物组、试剂盒和检测方法。

背景技术

病原微生物在临床上的传统诊断方法主要包括：(1)镜检。凡在形态和染色性上具有特征的致病菌，直接涂片染色后显微镜观察有助于初步诊断。(2)细菌培养。选择适宜的培养基、pH、培养时间、温度等，提供特定细菌生长所需的必要条件。(3)生化试验。细菌生化反应是依据各种细菌具有不同的酶系统，对营养物质的分解所产生的代谢产物不同，以此来鉴别细菌。(4)血清学鉴定。根据相应抗原与抗体反应的特异性，采用含有已知特异抗体的免疫血清，对其分离的待检测菌进行属、种和血清型鉴定。(5)抗原抗体检测。原理是用已知的特异性抗体测未知的细菌抗原成分。(6)分子生物学方法。随着分子生物学技术的应用，微生物学的检测技术从生物学检查进展到分子生物学的鉴定，不同种的病原微生物具有不同的基因序列，故可通过检测病原微生物的特异性基因序列的存在与否进行检测。常用的方法主要有核酸杂交和聚合配链反应(PCR)等。

当前，应用于临床实验室病原检测的分子生物学技术主要包括基于病原微生物DNA或RNA的检测技术如分子杂交、核酸扩增的方法；基于宏基因组二代测序的方法；以及以DNA序列分析、基因芯片和以蛋白质组学为基础的质谱检测技术等。以各技术的代表产品为例详细说明：(1)基于荧光定量PCR技术，以法国梅里埃的FiliArray系列为例，其中的脑炎脑膜炎症候群病原体检测试剂盒可在1小时内完成检测，一次性可检测的病原体较少。该技术根据不同物种DNA独特的溶解曲线在高分辨精度下对其进行鉴别，局限于溶解曲线的特异性及芯片的大小，导致漏检的风险较高。并且增加病原种类的可能性不高。(2)基于多重RT-PCR技术，Luminex脑脊液细菌多重检测试剂盒(液相芯片法)、脑脊液病毒多重检测试剂盒(液相芯片法)正在进入临床推广阶段，该试剂盒基于多重RT-PCR技术，虽然检测周期短、成本较低，但覆盖的病原体较少，漏检的风险较高。(3)基于宏基因组二代测序技术，以华大基因的PMseq产品为例，该产品可以在24h内鉴定近8千种病原，可以尽可能地检出未知病原，但数据利用率低、检测成本较高，且由于是无偏向测序，检出病原种类较多，难以精准定位致病病原。

发明内容

本发明提供一种用于检测病原体的引物组、试剂盒和检测方法，能够一次性检测至少20种靶标，特异性较强，成本低。

根据第一方面，一种实施例中提供一种用于病原体的引物组，包括至少60对引物对，每对上述引物对由正向引物与反向引物组成，上述引物对选自SEQ ID NO：1～154所示核苷酸。任选地，上述引物组用于在同一反应体系中，对上述病原体的特异序列进行多重PCR靶向扩增。