[发明专利]一种纳米胶体金及其制备方法与应用

说明书

本发明属于免疫检测技术领域，具体涉及一种免疫检测用纳米胶体金，并进一步公开其制备方法与应用。本发明所述纳米胶体金的制备方法，在现有一步还原法制备胶体金颗粒方法的基础上，通过增加稳定剂的方式，以改变氯金酸溶液的离子强度，并对氯金酸离子进行有效的稳定保护，而整个反应体系在高温煮沸条件下进行反应，反应液在高温下以及稳定剂的作用下，会缓慢稳定的形成晶核并慢慢增长为大粒径的胶体金。本发明所述方法制备得到的胶体金，形成的胶体金颗粒尺寸均一、性能稳定，且几乎每批制备的胶体金颗粒大小、均匀度都一致，批间差异小，后续免疫检测的性能更为稳定。

技术领域

本发明属于免疫检测技术领域，具体涉及一种免疫检测用纳米胶体金，并进一步公开其制备方法与应用。

背景技术

胶体金（colloidal gold），又称金溶胶（gold solution），是金盐被还原成金单质后形成的稳定、均匀、呈单一分散状态悬浮在液体中的金颗粒悬浮液。金溶胶颗粒由一个金原子及包围在外的双离子层构成，分散相粒子直径多在l-150nm之间。胶体金属于多相不均匀体系，颜色呈桔红色到紫红色。胶体金可以作为标记物用于免疫组织化学，近10多年来胶体金标记已经发展为一项重要的免疫标记技术。胶体金免疫分析在药物检测、生物医学等许多领域的研究已经得到发展，并越来越受到相关研究领域的重视。

据研究，胶体金的形貌和尺寸会影响纳米粒子的性质，胶体金颗粒的形貌及尺寸的差异、以及电介质和表面吸附情况等不同均会导致粒子表面等离子共振（SPR）吸收峰位置发生改变。根据 Mie理论，由于球形金属纳米粒子只有一个SPR峰，可通过分析紫外-可见光吸收谱（UV-vis）的峰值强度、半波峰宽和吸收峰的位置来判断胶体金的性质，而且最大吸收波长取决于粒子的大小，半波峰的宽窄取决于粒子尺寸分布，半波峰越窄，表明粒子尺寸分布越窄，粒径均一。吸光值较高、峰形尖窄是单分散性纳米胶体金的象征。

现有技术中，胶体金的制备多是由氯金酸（HAuCl₄）在还原剂（如白磷、抗坏血酸、乙醇、过氧化氢、枸橼酸钠和鞣酸等）作用下被一步还原成金原子而聚集形成的纳米金颗粒，并且多采用柠檬酸钠进行还原法，这些粒子由于静电排斥作用而在溶液中分散成为一种稳定的胶体状态，用还原法可方便地从氯金酸制备各种不同粒径、不同颜色的胶体金颗粒。这种颗粒对蛋白质有着很强的吸附作用，并已广泛用于医学检验的快速诊断邻域。

但是，由于一步法还原过程中，纳米金成核和连续生长均在一步中同时完成，易导致所得的胶体金颗粒尺寸大小不易控制，且胶体颗粒的粒径分布也不均匀，并且对制备条件要求也比较苛刻，易造成批间差异较大。而在实际应用中，制得胶体金纳米颗粒的形状不规则或粒径不均一，会导致连接待标记抗体或蛋白质后的胶体金很不稳定，标记结合物容易解离和沉淀而导致扩散不完全，使得反应区底色过深和假阳性现象，进而严重影响免疫检测的效果和准确性。

发明内容

为此，本发明所要解决的技术问题在于提供一种纳米胶体金的制备方法，以解决现有技术中一步还原法制备纳米胶体金的方法存在制得胶体金颗粒尺寸大小不易控制、且胶体颗粒的粒径分布不均匀的问题；

本发明所要解决的第二个技术问题在于提供上述方法制备的纳米胶体金，所述纳米胶体金颗粒的尺寸大小易控制、且胶体颗粒的粒径分布更为均匀，用于免疫检测应用更为稳定。

为解决上述技术问题，本发明所述的一种纳米胶体金的制备方法，包括如下步骤：

（1）配制质量浓度0.5-1.5w/v%的氯金酸水溶液、质量浓度0.5-1.5w/v%的柠檬酸三钠水溶液、及摩尔浓度40-60mmol/L的稳定剂水溶液，备用；

（2）将所述氯金酸水溶液、柠檬酸三钠水溶液、以及稳定剂水溶液加入至沸水中，并继续煮沸反应；

（3）将上述反应液于常温放置，至形成晶核并增长为大粒径的胶体金，即得。

所述步骤（1）中，所述稳定剂包括磷酸氢二钠、硼砂和/或碳酸钠。