[发明专利]一种新旧红细胞的分离介质及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种新旧红细胞的分离介质及其制备方法与应用，所述的分离介质由邻苯二甲酸二甲酯和邻苯二甲酸二丁酯组成，其中邻苯二甲酸二甲酯和邻苯二甲酸二丁酯的体积比为(0.95～1.05):(1.95～2.05)。本发明利用网织红或新生红细胞的密度为1.085，陈旧红细胞的密度为1.114，本发明利用邻苯二甲酸二甲酯和二丁酯与红细胞互不相容的，且对红细胞无损伤的特性，将其配置成密度介于新旧红细胞之间溶液，因而在高速离心分离过程中，其在毛细管中会明显分为四层，将新旧红细胞完全分开，保证测试结果的准确性，增强测试结果的精度。本发明的分离介质的耗材简单，采用本发明的分离介质来分离新旧红细胞，需要的时间短，用血量少，而且其结果直观，误差小，可以广泛应用于常规分离检测使用。

技术领域

本发明属于细胞分离技术领域，具体涉及一种新旧红细胞的分离介质及其制备方法与应用。

背景技术

在准确鉴定血型和临床输血不良反应调查等检测中，都需要分离新旧红细胞，通过新旧红细胞比重的差异获取一定新旧红细胞的数量来鉴定血型。目前，新旧红细胞的分离主要是采用毛细管超速离心分离方法。毛细管超速离心分离方法主要是利用由于新鲜细胞和陈旧细胞的核质比有一定的差异致新旧红细胞的密度有所差异，因而其在超速离心过程中，沉降速度不一样，使不同密度的细胞进行层次分离，从而达到分离新、旧红细胞的目的。目前新旧红细胞的分离单纯依靠目测对分离后的近心端的红细胞作为患者网织红或新生红细胞，远心端的红细胞作为陈旧细胞或输入的献血者红细胞，但是新旧红细胞分离后的其界限并不明显，不同的患者网织红或新生红细胞量会有区别，通过肉眼的主观判断易存在的误差比较大，导致分离后的检测结果不准确，延误患者的输血治疗。

发明内容

本发明的目的是提供一种新旧红细胞的分离介质及其制备方法与应用，解决超速离心分离过程中，新旧红细胞界限不明显，分离检测结果不准确的问题。

本发明这种新旧红细胞的分离介质由邻苯二甲酸二甲酯(相对密度1.190-1.193)和邻苯二甲酸二丁酯(相对密度1.0463-1.0475)组成，其中邻苯二甲酸二甲酯和邻苯二甲酸二丁酯的体积比为(0.95～1.05):(1.95～2.05)。

作为优选，邻苯二甲酸二甲酯和邻苯二甲酸二丁酯的体积比为1:2。

所述新旧红细胞的分离介质的制备方法，包括以下步骤：按照苯二甲酸二甲酯和二丁酯的设定的体积比，将两种材料进行混合，混合均匀后，测试其密度后，即得新旧红细胞的分离介质。

所述的新旧红细胞的分离介质的密度为1.094～1.096。

所述的采用新旧红细胞的分离介质分离新旧红细胞的方法，包括以下步骤：首先灌入患者洗涤后的压积红细胞，再将分离介质灌入毛细管中，接着在红细胞端灌入4-5mm封口泥，进行封口，然后将毛细管置于高速离心机中进行分离，分离完毕后，毛细管中分为四层：近心端为少量血浆层、网织红或新生红细胞层，中间层分离介质层和远心端为陈旧红细胞层；砂轮截取近心端的网织红或新生红细胞层用于测试；网织红或新生红细胞层的量不同患者会有差异。

所述的压积红细胞的灌入量为65～67mm，新旧红细胞分离介质的灌入量为2.5～3.5uL，长度为2.5～3.5mm。

所述的离心转速为10000～12000r；离心时间为20～25min。

本发明的有益效果：网织红或新生红细胞的密度为1.085，陈旧红细胞的密度为1.114，本发明利用邻苯二甲酸二甲酯和二丁酯与红细胞互不相溶，且对红细胞无损伤的特性，将其配置成密度介于新旧红细胞之间溶液，因而在高速离心分离过程中，其在毛细管中会明显分为四层，将新旧红细胞完全分开，保证测试结果的准确性，增强测试结果的精度。本发明的分离介质的耗材简单，采用本发明的分离介质来分离新旧红细胞，需要的时间短，用血量少，而且其结果直观，误差小，可以广泛应用于常规分离检测使用。

附图说明