[发明专利]SIRPα变体或其融合蛋白及其应用

说明书

本发明公开了SIRPα变体或其融合蛋白及其应用，所述SIRPα变体具有如SEQ ID NO.2～3所示的氨基酸序列；所述融合蛋白包括SIRPα或其变体，以及第二蛋白；所述第二蛋白为IgG Fc或His6；本发明的变体和融合蛋白对CD47具有较高的亲和力，可以阻断SIRPα与CD47的结合，进而实现肿瘤的治疗。

技术领域

本发明属于肿瘤治疗和分子免疫学领域，涉及SIRPα变体或其融合蛋白及其用途。

背景技术

巨噬细胞是人体固有的免疫系统的主要成员，巨噬细胞通过吞噬作用识别和清除外来的、受损的或老化的细胞，以保持内环境的稳定，而CD47在肿瘤细胞表面的高表达，抑制巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬，进而导致肿瘤患者体内，巨噬细胞无法清除杀灭肿瘤细胞。以CD47-SIRPα相互作用为靶点拮抗剂(抗CD47抗体、抗SIRPα-抗体以及SIRPα-Fc融合蛋白等)，可通过封闭CD47和SIRPα结合而激活巨噬细胞吞噬作用，使固有免疫反应系统发挥作用，增强抗肿瘤免疫反应。

抗CD47抗体或SIRPα-Fc融合蛋白可通过Fc效应子功能发挥作用，实现对肿瘤细胞的杀伤。如抗体依赖性细胞毒作用(ADCC)和补体依赖性细胞毒作用(CDC)；同时抗CD47抗体可以通过阻断肿瘤细胞上的CD47与巨噬细胞或树突状细胞上的SIRPα结合而增强两种细胞对肿瘤细胞吞噬并加工提呈给T细胞，从而激活肿瘤细胞特异性的适应性免疫；抗CD47抗体还可通过诱导凋亡而直接清除肿瘤细胞，以上说明CD47可以通过多种途径参与和调节机体对肿瘤细胞的识别和清除，是一个很有潜力的抗肿瘤靶点。

由于CD47表达广泛，在正常细胞如红细胞、血小板、白细胞等血细胞上均表达，是细胞进化出的一种自我保护机制，保护正常细胞不被巨噬细胞清除。这同时导致了CD47与健康组织的结合需要施用更大的治疗剂量才能实现癌细胞上足够的受体占据，以及直接抑制“不要吃我”的信号会引入潜在的脱靶毒性的问题。目前国内外有多家企业在开发基于CD47的药物，且发现SIRPαFc具有穿透性和组织分布性好、安全性高的特点，但是目前的SIRPα分子设计在有效性与生产成本等方面仍存在局限性。

发明内容

为了弥补现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供一种具有更高靶点结合活性的SIRPα变体及其融合蛋白。

本发明的目的之二在于提供一种检测CD47存在或水平的方法和产品。

本发明的目的之三在于提供一种阻断SIRPα与CD47的结合的方法和产品。

本发明的目的之四在于提供一种治疗具有CD47上调的疾病细胞为特点的方法和产品。

本发明的第一方面提供了一种SIRPα变体，其特征在于，所述SIRPα变体包括与SEQID NO.1具有至少80％、至少85％、至少90％一致性的氨基酸序列。所述SIRPα变体与CD47的亲和力与野生型SIRPα相比提高至少3倍、至少5倍。

进一步，所述SIRPα变体包含对SEQ ID NO.1所示氨基酸序列中的第29、31、42、45、50、51、52、61、63、64、66、68、75、77或100的一个或多个位点上的修饰，其中，所述修饰可以是氨基酸的插入、缺失或取代。

进一步，所述修饰是取代。

进一步，SEQ ID NO.1所示氨基酸序列中的第29、42、45、50、51、52、61、63、64、66、68、75、77位中的至少一个被置换为SEQ ID NO.2所示的第29、42、45、50、51、52、61、63、64、66、68、75、77位的相应氨基酸。

进一步，SEQ ID NO.1所示氨基酸序列中的第29、31、45、51、52、63、64、68、75、77、100位中的至少一个被置换为SEQ ID NO.3所示的第29、31、45、51、52、63、64、68、75、77、100位的相应氨基酸。