[发明专利]一种蓝光下调控染色质长距离相互作用的光遗传学工具

权利要求书

1.一种蓝光下调控染色质长距离相互作用的方法，其特征在于，在蓝光诱导下蓝光受体CRY2和CIB1形成蛋白复合体，调控染色质长距离相互作用，具体包括：

1）模式植物拟南芥的蓝光受体CRY2基因及下游因子CIB1基因被克隆到酵母表达载体上；

2）通过酵母双杂交实验证实蓝光诱导蓝光受体CRY2和下游因子CIB1的相互作用形成蛋白复合体；

3）将分别包含LexA和GAL4BD的结合序列的两个人工构建的染色体片段通过线性化整合和同源重组的方式构建到酿酒酵母EGY48菌株的第5号染色体上，相距12.1kb；

其中，线性化整合包含LexA的载体的主要元件结构为LexAops-GAL1minimalpromoter-YFP，其碱基序列如SEQIDNO.1所示；

其中，同源重组包含GAL4BD的结合序列的载体的主要控制元件为Homologous arm1-UEE(PGK1)-GAL4ops-proTEF1-KanMX-TerTEF1- Homologous arm2，其碱基序列如SEQIDNO.2所示；

4）在酵母细胞内转化载体pLexA-CRY2和pBridge-CIB1，所述pLexA-CRY2表达融合蛋白BD-CRY2，所述pBridge-CIB1表达融合蛋白GAL4BD-CIB1；使得融合蛋白BD-CRY2识别LexA的结合序列，融合蛋白GAL4BD-CIB1识别GAL4BD的结合序列；

所述蛋白CRY2的氨基酸序列如SEQIDNO.3所示；

所述蛋白CIB1的氨基酸序列如SEQIDNO.4所示；

5）当使用蓝光照射酵母细胞后，融合蛋白BD-CRY2和融合蛋白GAL4BD-CIB1发生相互作用形成蛋白复合体；从而，在空间上拉近与它们相互作用的LexA的结合序列和GAL4BD的结合序列；最终，使得相距12.1kb的LexA的结合序列和GAL4BD的结合序列发生长距离的染色质相互作用。

2.如权利要求1所述一种蓝光下调控染色质长距离相互作用的方法，其特征在于，所述克隆通过测序的方法验证序列的正确性；所述模式植物拟南芥的蓝光受体CRY2和下游因子CIB1基因均克隆于拟南芥生态型Col-0；

通过转有p8op-lacZ报告质粒的酵母显蓝，确定CRY2和CIB1是否在蓝光下有相互作用；

使用ChIP-qPCR实验鉴定BD-CRY2和GAL4BD-CIB1对相应结合序列的结合是否真实存在；

使用染色体构象捕获Chromosome Conformation Capture技术鉴定目标片段间的长距离相互作用是否真实存在。