[发明专利]一种红树内生真菌中异香豆素类化合物及其制备方法与应用

说明书

本发明涉及一种红树内生真菌中异香豆素类化合物及其制备方法与应用，所述异香豆素类化合物具有化合物1‑8所示的结构：

技术领域

本发明属于红树内生真菌次级代谢产物领域，具体涉及一种红树内生真菌中异香豆素类化合物及其制备方法与应用。

背景技术

海洋来源的内生真菌结构新颖活性独特的化合物重要来源之一。近年来，一些新的活性化合物已经从真菌Penicillum中分离得到，例如：抗炎活性化合物chrysogenester，细胞毒的化合物penicimenolides B-D和penitalarins A-C，具有杀毒活性的化合物simpterpenoid A，抗真菌化合物brocapyrrozin A。前期研究发现内生真菌Penicillum乙酸乙酯粗提物具有一定的抗菌活性。

发明内容

本发明所述的红树内生真菌(Penicillum，以下简称TGM112)分离自红树尖瓣海莲，其菌种保藏信息：保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；保藏日期：2018年11月9日；保藏编号：CGMCC No.16499；分类命名：青霉Penicillium sp.。

本发明提供一种异香豆素类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于所述异香豆素类化合物具有化合物1-8所示的结构：

本发明的另一实施方案，提供一种同时制备化合物1-8的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)配制种子培养基，将TGM112菌株接入种子培养基，26～28℃，培养3～4天得种子培养液；

(2)将步骤(1)得到的种子培养液接入发酵培养基中，26～28℃静置培养21～24天得发酵物；

(3)将步骤(2)得到的发酵物中的发酵液和菌体分离，发酵液和菌体分别用等体积的乙酸乙酯萃取3～5次，合并萃取液后减压浓缩得到浸膏；

(4)步骤(3)得到的浸膏经过减压硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯按100:0、90:10、80:20、70:30、60:40，50:50、40:60、30:70、20:80、10:90、0:100梯度洗脱，每个梯度收集两个柱体积，其中20:80梯度洗脱得到的馏分浓缩后经Sephadex LH-20凝胶柱层析，洗脱剂为甲醇：氯仿＝1:1，再经高效液相色谱HPLC制备，色谱柱为Agilent C18,9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为CH₃CN:H₂O＝45:55，最终得到化合物1、化合物4、化合物5、化合物6和化合物7；其中0:100梯度得到的馏分浓缩后经Sephadex LH-20凝胶柱层析，洗脱剂为甲醇：氯仿＝1:1，再经高效液相色谱HPLC制备，色谱柱为Agilent C18,9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH:H₂O＝45:55最终得到化合物2、化合物3和化合物8。

其中所述洗脱剂或流动相的比例均为体积比；所述种子培养基中含有葡萄糖1.5％–3.0％、酵母膏0.1％–0.5％、蛋白胨0.1％–0.5％、粗海盐0.11％–0.6％、适量的水；所述发酵培养基中含有葡萄糖1.6％–3.5％、酵母膏0.1％–0.5％、蛋白胨0.1％–0.5％、粗海盐0.11％–0.6％、适量的水；上述百分比均为重量百分比；所述种子培养基和发酵培养基均需120℃灭25–30分钟。

本发明提供一种药物组合物，其特征在于以本发明上述化合物1-8(尤其是化合物1、2、5、6、8)或其药学上可接受的盐作为活性成分。

本发明提供的上述药物组合物，还可包含其他杀虫药物；也可以包含药学上可接受的辅料(优选药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂)。上述药物组合物的剂型可以是固体制剂、半固体制剂或液体制剂。