[发明专利]一种基于羊膜芯片的宫内感染模型建立方法有效
| 申请号： | 201811477461.2 | 申请日： | 2018-12-05 |
| 公开（公告）号： | CN111269871B | 公开（公告）日： | 2023-06-13 |
| 发明（设计）人： | 秦建华;尹方超;王慧;赵孟乾 | 申请（专利权）人： | 中国科学院大连化学物理研究所 |
| 主分类号： | C12N5/00 | 分类号： | C12N5/00;C12N5/073 |
| 代理公司： | 沈阳晨创科技专利代理有限责任公司 21001 | 代理人： | 张晨 |
| 地址： | 116023 *** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 羊膜 芯片 宫内 感染 模型 建立 方法 | ||
1.一种基于羊膜芯片的宫内感染模型建立方法，其特征在于：采用三通道的羊膜芯片，其中中间胶原通道接种hiPSc细胞，同时进行原位向羊膜腔的诱导分化；该模型的构建方法的主要步骤为：
(1)羊膜芯片的制备：采用常规的光刻蚀制作SU-8聚合物模板，将未固化PDMS聚合物溶液倾倒入SU-8聚合物模板和空白模板中，加热固化PDMS聚合物溶液，剥离固化PDMS聚合物芯片，将带结构的PDMS聚合物芯片打孔后，将结构芯片(1)和空白芯片(2)通过不可逆封接键合为羊膜芯片，将羊膜芯片高温高压灭菌后放入培养皿中使用；
(2)羊膜的诱导与分化：将重悬了hiPSc细胞于matrigel从胶原通道3入口处灌入芯片中，将芯片放于37摄氏度培养箱中使matrigel固化5-20分钟，固化完成后，在芯片的两侧通道中加入mTesR1培养基，每天换液；
(3)宫内感染：宫内感染为大肠杆菌的感染，将大肠杆菌以1X107CFU/ml的密度重悬于mTesR1培养基中，并灌入芯片两侧的培养基通道4中；放于37摄氏度培养箱中分别培养24小时、48小时；
所述羊膜芯片由结构芯片(1)和空白芯片(2)上下不可逆封接，所述结构芯片(1)包括三个通道，中间为胶原通道(3)，两侧均为培养基通道(4)，所述胶原通道(3)和两侧的培养基通道(4)均通过PDMS微柱(5)分开。
2.按照权利要求1所述的羊膜芯片的宫内感染模型建立方法，其特征在于：所述PDMS微柱(5)通过两次曝光制作，具体步骤为：第一次在干净的玻璃片上涂布一层SU-8光刻胶，进行全曝光，第二次在已曝光的SU-8聚合物模板，涂布一层SU-8光刻胶，进行微柱结构的曝光，得到PDMS微柱(5)。
3.按照权利要求1所述基于羊膜芯片的宫内感染模型建立方法，其特征在于：所述羊膜芯片的材料为可透光透气的聚二甲基硅氧烷聚合物，其中聚二甲基硅氧烷单体与引发剂比例为15～5:1。
4.按照权利要求2所述基于羊膜芯片的宫内感染模型建立方法，其特征在于：所述PDMS微柱(5)底部与下层空白芯片(2)的距离为100-300微米，PDMS微柱(5)厚度为300-600微米。
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