[发明专利]一种培育具有马铃薯Y病毒属广谱病毒抗性的转基因大豆的方法

说明书

本发明公开了一种培育具有马铃薯Y病毒属广谱病毒抗性的转基因大豆的方法。该方法是通过基因工程的手段沉默大豆中的eIF4E基因获得具有广谱病毒抗性的转基因大豆；优选通过构建SEQ ID NO.1所示的大豆eIF4E基因干扰片段，将其导入大豆获得具有广谱病毒抗性的转基因大豆。按照该方法能够获得具有马铃薯Y病毒属广谱病毒抗性的转基因大豆，为抗病大豆育种工作具有深远意义。

技术领域

本发明属于基因工程领域，涉及一种培育具有马铃薯Y病毒属广谱病毒抗性的转基因大豆的方法。

背景技术

大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus，SMV)病是一种全球性大豆病害，广泛分布于世界各大豆产区，严重影响大豆的产量和品质。SMV属于马铃薯Y病毒科(Potyviridae)，马铃薯Y病毒属(Potyvirus)，大豆花叶病毒种。大豆感染SMV后，会产生花叶和坏死等症状，造成大豆光合面积减少和光合能力降低，植株矮化，生长量下降，籽粒出现褐斑，造成大豆产量损失约35％-50％，甚至绝收。

根据遗传学标准可将抗性基因划分为显性抗性基因和隐性抗性基因两个类型，寄主拥有显性抗性基因或者病毒繁殖所依赖的隐性抗性基因发生突变、缺失都将阻碍病毒的侵染。大多数已知的显性抗性基因主要是在抗真菌和细菌病害中发挥作用，而在植物抗病毒研究中则更容易发现隐性抗性基因。目前，在已知的植物对Potyvirus的抗性基因中，40％是隐性的，其中绝大多数与真核翻译起始因子eIF4E(Eukaryotic translationinitiation factor 4E)有关。eIF4E能够连接在植物mRNA帽子结构上，对蛋白翻译的起始阶段进行调节，所以目前普遍认为病毒的VPg蛋白起到类似于帽子结构的作用，通过植物eIF4E介导病毒RNA的翻译，病毒的VPg蛋白能否与寄主的eIF4E发生互作影响着寄主对病毒的抗性。

eIF4E为植物抗病毒研究提供了新的思路，即可以通过转基因技术将其干扰片段导入植株体内，通过诱发RNA干扰(RNA interference，RNAi)在转录水平沉默同源靶基因的功能，从而获得抗病材料。因此，应用基于RNAi原理的大豆转基因技术，对隐性抗病基因eIF4E进行特异性沉默，进而通过抗病鉴定确认该基因是否对SMV存在抗性，这对挖掘SMV隐性抗病基因、明确其抗性机制以及探索隐性抗病基因在转基因抗病育种中的应用具有重要价值。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的上述不足，提供一种培育具有马铃薯Y病毒属广谱病毒抗性的转基因大豆的方法。

本发明的目的可通过以下技术方案实现：

一种培育具有马铃薯Y病毒属广谱病毒抗性的转基因大豆的方法，通过基因工程的手段沉默大豆中的eIF4E基因获得具有广谱病毒抗性的转基因大豆。

所述的方法，优选通过构建SEQ ID NO.1所示的大豆eIF4E基因干扰片段，将其导入大豆获得具有广谱病毒抗性的转基因大豆。

所述的方法，进一步优选通过构建含有SEQ ID NO.1所示的大豆eIF4E基因干扰片段的RNAi载体，将其导入大豆获得具有广谱病毒抗性的转基因大豆。

大豆eIF4E基因在培育具有马铃薯Y病毒属广谱病毒抗性的转基因大豆中的应用。

所述的马铃薯Y病毒属广谱病毒抗性包括对SMV、BCMV和WMV的抗性。

SEQ ID NO.1所示的大豆eIF4E基因干扰片段在培育具有马铃薯Y病毒属广谱病毒抗性的转基因大豆中的应用。

所述的马铃薯Y病毒属广谱病毒抗性包括对SMV、BCMV和WMV的抗性。

有益效果：