[发明专利]曲霉属真菌及其应用

说明书

本发明涉及一曲霉属真菌(Aspergillus sp.EGF15‑0‑3)及其应用。其保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC 60476。本发明的曲霉属真菌(Aspergillus sp.EGF15‑0‑3)可以制备得到苯甲醛叶立德杂合二聚体类化合物，为稀有天然产物提供一种可再生的生物来源，为其进一步生物活性研究和生物学应用提供了充足的物质基础。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及曲霉属真菌及其应用。

背景技术

叶立德类生物碱的结构特征为两分子氨基酸形成的二酮哌嗪类化合物。在此类物质中如果一分子的氨基酸为色氨酸，则构成常见的吲哚二酮哌嗪类生物碱衍生物(Borthwick AD,Chem.Rev.2012,112,3641-3176)。而异戊烯基吲哚二酮哌嗪类生物碱是由吲哚二酮哌嗪类化合物在吲哚异戊烯基转移酶的催化下通过异戊烯基的迁移反应而成，广泛存在于真菌Aspergillus sp.,Penicillium sp., Pestalotiopsis sp.和Chromocleista sp.中(Li SM,Natural Products Reports.,2010, 27,57-78)。与非异戊烯基取代的吲哚二酮哌嗪类生物碱相比，这些异戊烯基取代的吲哚二酮哌嗪生物碱大多具有广泛的生理活性。

目前苯甲醛类化合物结构特征为苯环的1位为醛基取代，2位为直链的7碳烷(烯)烃取代基，且与苯环形成1～3个共轭与非共轭双键(A)，或者与2位的烷烃侧链与3位羟基成呋喃(B)或吡喃环(B、C、D)(黄玉玲，海洋真菌Aspergillus sp.中的苯甲醛衍生物研究，中草药，2012，43(5):837-840.)；苯环的 3位和6位羟基取代，而5位为异戊烯基取代。

自1976年Gatti教授(Gatti G.,J.C.S.Chem.Comm.,1976,435-436)从Apsergillus amstelodami的菌丝体中分离得到首个苯甲醛叶立德杂合二聚体cryptoechinulin B和cryptoechinulin D，并推测二者分别由auroglaucine和neoechinuline B或neoechinuline C通过D-A反应获得。并分别将auroglaucine和neoechinuline B和neoechinuline C密封在真空管中加热到150℃条件反应制得(未见实验条件报道)。1977年Inoue教授(Inoue S,Yagugaku Zasshi,1977,97, 576-581)将auroglaucine和Cryptoechinulin A(即neoechinuline B)在真空密封真空管120℃反应1.5小时得到cryptoechinulin B(产率37％)和一个12位的立体异构体(产率6％)，并确定其相对立体构型。后来cryptoechinulin D又被中国海洋大学李德海教授(Li DL,Helv.Chim.Acta.,2008,91,1888-1893)从福建红树林根系土壤中分离得到的Eurotiumrubrum中分离得到，并采用CD和ECD的方法确定了绝对构型。到目前为止，仅有另外两对苯甲醛和叶立德杂合二聚体类化合物报道。从中国福建红树根际海泥中分离得到的疏展曲霉菌H1-1 (Aspergillus effuses H1-1)中(Gao HQ,Arch.Pharm.Res.2013,36,952-956；GaoHQ,Org.Biomol.Chem.,2012,10,9501-9506.)分离得到苯甲醛叶立德杂合螺缩酮类二酮哌嗪生物碱Dihydrocryptoechinulin D(式1)和Effusin A(式2)。DihydrocryptoechinulinD和Cryptoechinulin D为同系物，二者差别为26、27位双键的有无。Effusin A则含有氮杂缩酮(N，O)螺环部分，其与 (Dihydro)cryptoechinulin D的生源不同，不能通过简单的Diela-Alder反应形成。研究结果表明没有拆分的cryptoechinulin D外消旋体和(+)cryptoechinulin D的抑制P388肿瘤细胞株的细胞毒活性IC₅₀值分别为3.43μM和2.50μM，而(-) cryptoechinulin D对P388肿瘤细胞的IC₅₀值仅为11.3μM。而对HL-60、BEL-7402 和A-549三种细胞株没有抗肿瘤活性(IC₅₀100μM)。Dihydrocryptoechinulin D 的体外抗肿瘤活性研究表明，Dihydrocryptoechinulin D对P388和HL-60肿瘤细胞株具有明显的细胞毒活性，其IC₅₀值分别为1.83μM、4.80μM。因此，Cryptoechinulin D和Effusin A等苯甲醛叶立德杂合二聚体类化合物表现有潜在的抗肿瘤活性。然而苯甲醛叶立德杂合二聚体类化合物的结构复杂，且合成反应条件不明，产率较低。而已报到的提取方法效率低且成本高，因此寻找新的制备方法具有重要意义。