[发明专利]聚乙二醇修饰的NPFF及其用途

权利要求书

1.一种聚乙二醇修饰的NPFF，采用聚乙二醇修饰NPFF的N端，其分子式是C₆₀H₈₇N₁₅O₁₃，分子量是1226.30，分子结构式是：

2.一种权利要求1所述的聚乙二醇修饰的NPFF制备方法，其特点是包括以下步骤：

步骤一、在反应容器中，加入N,N-二甲基酰胺，再加入wang树脂，振荡25min；

步骤二、抽滤取出溶剂，加入相当于合成多肽4倍摩尔的Fmoc保护的Phe(Fmoc-L-Phe(4-tBu)-OH)，再加入相当于12倍合成多肽摩尔的二环乙基碳二亚胺和4-二甲氨基吡啶，再加入DMF溶解，振荡35min，用醋酸酐封闭；

步骤三、抽去DMF，加入体积分数20％的哌啶DMF溶液，抽干10min后，再加入体积分数20％的哌啶DMF溶液，反应20min；

步骤四、抽去哌啶DMF溶液，用无菌移液器吸头从反应容器中取出十粒树脂，放入空白试管，加入氰化钾、茚三酮、苯酚溶液各一滴，106-111℃加热6min，变深蓝色即为阳性反应；

步骤五、依次用DMF、甲醇、DMF清洗三次；

步骤六、将合成多肽3倍摩尔的保护氨基酸、o-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸盐用DMF溶解后，加入反应容器中，再迅速加入合成多肽12倍摩尔的4-甲基吗啉，反应35min；

步骤七、依次加入10ml/g的DMF洗2次，10ml/g的甲醇洗4次，10ml/g的DMF洗2次；

步骤八、重复步骤二至步骤七，按照序列C段到N端残基顺序依次缩合以下序列氨基酸：Phe-Leu-Phe-Gln-Pro-Gln-Arg-Phe-NH₂；

步骤九、质谱检测NPFF为主峰，加入相当于合成NPFF 3倍摩尔的NH₂-(CH₂CH₂O)₈-CH₂CH₂COOH，相当于合成多肽6倍摩尔的HBTU，DMF溶解后，加入相当于NPFF合成20倍摩尔的NMM反应40min；以步骤四的方法检测后显示无色，取出Fmoc保护基团；

步骤十、加入10ml/g的DMF3次，10ml/g的甲醇3次，10ml/g的DMF3次，10ml/g的DCM3次，抽干30min；

步骤十一、制备三氟乙酸95％V/V，加入10ml/g的切割液；超纯水2％V/V；三异丙基硅烷1％V/V；1,2-乙二硫醇2％V/V；切割树脂150min；

步骤十二、氯气保护下吹干裂解液，乙醚洗涤8次，24℃下挥发干；

步骤十三、高效液相色谱法纯化，流动相：体积分数为0.1％三氟乙酸和乙腈以50:50体积比混合而成，获得聚乙二醇修饰的NPFF纯品。