[发明专利]大麦P3G和C3G合成主效QTL紧密连锁的InDel分子标记及其应用

权利要求书

1.一种用于大麦籽粒花青素成分芍药色素-3-葡萄糖苷(Peonidin-3-glucoside,P3G)和矢车菊素-3-葡萄糖苷(Cyanidin-3-glucoside,C3G)合成主效QTLPBG.ant-2H检测试剂盒，其特征在于，包括由SEQ ID NO:2～3所示核苷酸序列的2条引物组成的引物组，还包括marker，所述marker中包括2个DNA分子片段，长度相差113bp，两个DNA分子片段的分子量分别为612bp和499bp，其中612bp序列由图2中R-BAID2H所示序列所示；499bp序列由图2中G-BAID2H所示序列所示；R-BAID2H代表紫色大麦RUSSIA68的BAID2H序列，G-BAID2H代表无色大麦Gairdner的BAID2H序列。

2.一种用于大麦籽粒花青素成分P3G和C3G合成主效QTL PBG.ant-2H检测的方法，其特征在于，以大麦叶片基因组DNA为模板，以由SEQ ID NO:2～3所示核苷酸序列的2条引物组成的引物组进行PCR扩增，根据扩增产物判断与大麦籽粒中的花青素成分P3G和C3G合成主效QTL PBG.ant-2H紧密连锁BAID2H序列的有无，进而预测大麦种粒中花青素P3G和C3G的含量的有无或高低，其中，R-BAID2H代表紫色大麦RUSSIA68的BAID2H序列，由图2中R-BAID2H所示612bp序列所示；G-BAID2H代表无色大麦Gairdner的BAID2H序列，由图2中G-BAID2H所示499bp序列所示；当扩增产物中片段数量为2，且一条序列为612bp，另一条序列为499bp时，则该植株中存在与PBG.ant-2H紧密连锁的R-BAID2H和G-BAID2H序列，且控制大麦籽粒中P3G和C3G合成的遗传位点为杂合型；当扩增产物仅为一个612bp的长片段时，则该植株存在与PBG.ant-2H紧密连锁的R-BAID2H序列，且控制大麦籽粒中P3G和C3G合成的遗传位点为纯合型；当扩增产物仅为一个499bp的短片段时，则该植株存在与PBG.ant-2H紧密连锁的G-BAID2H序列，且控制大麦籽粒中P3G和C3G合成的遗传位点为纯合型。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述大麦叶片为大麦的幼嫩叶片。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，每25μL所述PCR扩增的体系包括：水和10～100ng基因组DNA、0.4μmol/L正向引物、0.4μmol/L反向引物、3mmol/L MgCl2，1mmol/LdNTPs和2.5U Taq DNA聚合酶。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的程序为：95℃变性5min；94℃变性1min；60℃退火1min；72℃延伸1min，该过程35个循环；72℃终延伸10min。