[发明专利]一种丙型肝炎病毒抗原荧光免疫层析检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种丙型肝炎病毒抗原荧光免疫层析检测试剂盒及其制备方法，该检测试剂盒包括以下组分：荧光微球标记的丙型肝炎病毒抗体1、丙型肝炎病毒抗体2、羊抗鼠捕获抗体、磷酸盐缓冲液和样品稀释液；该检测试剂盒的制备方法包括以下步骤：制备样品稀释液；制备荧光微球标记的丙型肝炎病毒抗体1；制备包被有荧光微球标记的丙型肝炎病毒抗体1的载体1；制备包被有丙型肝炎病毒抗体2和羊抗鼠捕获抗体的载体2；标准品，组装，即得荧光免疫层析检测试剂盒；该检测试剂盒，可实现现场快速、简便的进行丙型肝炎病毒抗原的定量检测；本发明的检测试剂盒具有较好的检测灵敏度、精密度和准确度。

技术领域

本发明涉及免疫检测分析技术领域，具体是一种丙型肝炎病毒抗原荧光免疫层析检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(HCV)所致，丙型肝炎经血液传播。目前中国有4000万以上的丙型肝炎病毒感染者，其中70％的丙肝患者发展为慢性肝炎，20％发展为肝硬化，12％发展为肝癌，危害严重。所以早发现、早诊断、早治疗对于丙肝患者具有重要的意义。

目前常见的丙型肝炎病毒早期检测方法包括核酸检测和抗原检测。核酸检测在设备和技术上要求较高，容易假阳，所以很难在常规和基层实验室中推广。抗原检测试剂多以酶联免疫、化学发光或者胶体金为主，如美国Ortho公司的ELISA试剂盒、湖南景达制药有限公司的ELISA检测试剂盒、Abbott的化学发光丙肝病毒核心抗原(HCV Core Ag)检测试剂盒等，但酶联免疫和化学发光均需要在中心检测实验室开展，而胶体金试剂又无法进行定量。

发明内容

本发明的目的在于提供一种丙型肝炎病毒抗原荧光免疫层析检测试剂盒及其制备方法，以解决现有技术中的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种丙型肝炎病毒抗原荧光免疫层析检测试剂盒，该荧光免疫层析检测试剂盒包括以下组分：荧光微球标记的丙型肝炎病毒抗体1、丙型肝炎病毒抗体2、羊抗鼠捕获抗体(质控线抗体)、磷酸盐缓冲液和样品稀释液。

作为优化，样品稀释液包括以下浓度的组分：Tris-HCl缓冲液100ml/L、CHAPS干粉15g/L、Triton X-1003ml/L和SDS 150g/L。

作为优化，Tris-HCl缓冲液的浓度为1mol/L，pH为8.0。

作为优化，磷酸盐缓冲液的浓度为0.01mol/L，pH为7.2-7.4。

一种丙型肝炎病毒抗原荧光免疫层析检测试剂盒的制备方法，该荧光免疫层析检测试剂盒的制备方法包括以下步骤：

(1)制备样品稀释液：取Tris-HCl缓冲液、CHAPS干粉、Triton X-100和SDS加入容器中混合均匀，定容，即得样品稀释液；

(2)制备荧光微球标记的丙型肝炎病毒抗体1：取荧光微球，用1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和N-羟基硫代琥珀酰亚胺活化，然后向其中加入丙型肝炎病毒抗体1，标记上后再用密封液密封，离心，保存，即得荧光微球标记的丙型肝炎病毒抗体1，备用；

(3)制备包被有荧光微球标记的丙型肝炎病毒抗体1的载体1：将步骤(2)所制得的荧光微球标记的丙型肝炎病毒抗体1用步骤(1)所制得的样品稀释液进行稀释，然后涂在载体1上，冻干，即得包被有荧光微球标记的丙型肝炎病毒抗体1的载体1；

(4)制备包被有丙型肝炎病毒抗体2和羊抗鼠捕获抗体的载体2：将丙型肝炎病毒抗体2和羊抗鼠捕获抗体分别用磷酸盐缓冲液进行稀释，然后将其用划膜仪划到载体2上，干燥，即得包被有丙型肝炎病毒抗体2和羊抗鼠捕获抗体的载体2；