[发明专利]一种制备聚肌胞的方法

说明书

本发明提供一种制备聚肌胞的方法，涉及生物技术领域，具体涉及一种制备聚肌胞的方法。该制备聚肌胞的方法，包括如下步骤：（1）分别合成聚肌苷酸Poly I和聚胞苷酸尿苷酸Poly C_nU，所述Poly C_nU中每n个连续的胞苷酸后插入了1个尿苷酸；（2）将聚胞苷酸尿苷酸Poly C_nU和聚肌苷酸Poly I退火形成错配的双链核糖核酸Poly I:C_nU；（3）将双链核糖核酸Poly I:C_nU采用S1核酸酶进行酶切，得到片段大小为n bp的聚肌胞。本发明制备聚肌胞的方法，操作简单，可获得长度一致的聚肌胞。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种制备聚肌胞的方法。

背景技术

聚肌苷酸胞苷酸（简称聚肌胞，Poly I:C）是一种安全高效的先天免疫激活剂，具有广谱抗病毒、抑制肿瘤细胞生长、增强机体免疫力等多种功能，全球市场容量潜力估值为每年数百亿美元。医学临床上，可用于慢性乙型肝炎、流行性出血热、流行性乙型脑炎、病毒性角膜炎等病毒性疾病治疗，对乳腺癌、前列腺癌等肿瘤的辅助性治疗已处于III期临床实验阶段。兽医临床上，可用于口蹄疫、禽流感、猪瘟等病毒性疫病的预防和治疗，亦可提高畜禽疫苗免疫效力。聚肌胞使用方便、广泛，可以与许多药物同时使用，具有协同或相加作用。无种属特异性，可广泛在家禽、猪、牛等动物上使用，同时还具有抗病毒谱广，毒性小、安全范围大的优点。

上世纪六十年代，Field等成功研制出合成聚肌胞方法。其基本工艺流程是：先分别合成聚肌苷酸（Poly I）和聚胞苷酸（Poly C）单链，然后将之混合退火获得双链聚肌胞。经过几十年的发展，聚肌胞工业化生产已十分成熟。但是，现有生产方法所获得的聚肌胞分子量范围为0.05kb~8.0kb、是长度不一的混合物。50多年来，国内外学者曾尝试各种分离纯化方法，但至今尚未解决。

发明内容

本发明的目的是提供一种制备聚肌胞的方法，该方法操作简单，可获得长度一致的聚肌胞。

本发明的目的采用下述技术方案实现。

一种制备聚肌胞的方法，包括如下步骤：

（1）分别合成聚肌苷酸Poly I和聚胞苷酸尿苷酸Poly C_nU，所述Poly C_nU中每n个连续的胞苷酸后插入了1个尿苷酸；

（2）将聚胞苷酸尿苷酸Poly C_nU和聚肌苷酸Poly I退火形成错配的双链核糖核酸PolyI:C_nU；

（3）将双链核糖核酸Poly I:C_nU采用S1核酸酶进行酶切，得到片段大小为n bp的聚肌胞。

在本发明中，n为自然数且12≤n≤1000。

在本发明中，酶切体系包括如下组分：15mg/ml的Poly I:C_nU 25μl，10×酶切缓冲液5μl，180U/μl的S1核酸酶1μl，ddH₂O 19μl。

优选的技术方案中，所述酶切条件为55-65℃金属浴，酶切反应时间为10min。

本发明巧妙地通过调整投料比，控制聚胞苷酸尿苷酸Poly C_nU链中胞苷酸的长度。再将错配的双链核糖核酸采用S1核酸酶进行酶切，获得了片段大小一致的聚肌胞，从而控制聚肌胞的质量及药效。申请人发现，采用其他单链特异性核酸酶进行酶切，并不能获得片段大小一致的聚肌胞。本发明方法简单，易于操作，具有可设计性，能够获得长度一致，结构均一的聚肌胞，且免疫效果不受影响，解决了50多年来尚未解决的技术难题。

附图说明

图1 错配的双链核糖核酸Poly I:C₁₂U的结构示意图。