[发明专利]循环核酸作为高血压、糖尿病和高血脂标志物的应用

说明书

本发明涉及循环核酸作为高血压、糖尿病和高血脂标志物的应用。本发明通过对冠心病患者血清循环miRNA的特异性系统筛选、稳定检测方法的建立，鉴定了一组针对动脉粥样硬化相关疾病的miRNA标志物分子；本发明进一步通过病例对照研究和前瞻性人群研究，发现了循环miRNA在动脉粥样硬化相关疾病预测中的重要贡献。本研究结果将为循环miRNA的临床应用提供重要的理论和方法学依据。

技术领域

本发明涉及循环核酸作为高血压、糖尿病和高血脂标志物的应用。具体而言，本发明涉及循环microRNA(miRNA)在高血压、糖尿病和高血脂预测中的应用；更具体而言，本发明涉及miR-10a-5p在高血压、糖尿病和高血脂预测中的应用，包括基于miR-10a-5p来制备用于高血压、糖尿病和高血脂预测的试剂盒、用于高血压、糖尿病和高血脂预测的微阵列以及利用所述试剂盒和所述微阵列进行高血压、糖尿病和高血脂预测的方法。

背景技术

动脉粥样硬化是一种机理尚未明确的慢性炎症性血管疾病，其发生机制一直被广泛关注和探讨。一般血管由外膜层、中膜层和内膜层组成。内膜层由血管最内侧的内皮细胞和内弹性膜构成。一般认为血管内皮细胞受损、功能紊乱是动脉粥样硬化的启动因素。血管内皮不仅保护血管结构的完整性，而且是血管对外界各种损伤刺激信号的感受器和反应器，对于维持血管稳态具有至关重要的作用。血管内皮细胞在缺血缺氧、高糖高脂、吸烟等多种危险因子的刺激下被激活，启动粥样硬化发生并参与整个过程。动脉粥样硬化相关疾病事件包括高血压、糖尿病和高血脂等，而目前的研究已经确定高血压、糖尿病和高血脂均是冠状动脉粥样硬化性心脏病(又称冠心病)的主要风险因素。

据世界卫生组织WHO统计，2015年全球约有876万人死于冠心病，占总死亡人数的15.5％，居全球十大死因之首(WHO 2017年1月更新数据)。事实上，在2000年到2015年间冠心病一直稳居全球十大死因之首。无论是在发达国家还是发展中国家，冠心病都是威胁居民生命健康的头号杀手。在中国，近年来冠心病死亡率逐年攀升。据《2017年中国卫生和计划生育统计年鉴》统计，2016年我国城市居民冠心病死亡率为113.46/10万，而且总体上男性患病率(116.73/10万)高于女性(110.09/10万)。冠心病严重威胁着我国人民的生命健康。

考虑到冠心病的严重威胁，探索和研究新的冠心病标志物及风险预测因子具有重要意义。特别地，如果能够通过风险预测早期识别高危人群(例如高血压、糖尿病和高血脂患者或具有罹患高血压、糖尿病和高血脂的风险的人群)并进行早期干预，有望成为防止严重心血管病事件发生的关键。就此而言，目前已知的标志物及风险预测因子还不能充分满足这方面的需求，所以需要筛选出新的可以用于预测动脉粥样硬化相关疾病的标志物及风险预测因子。理想的标志物需要符合以下要求：1)可通过对身体无损害的方式获取；2)对目标疾病有高度的灵敏度和精确性；3)能够在疾病早期进行检测；4)对与疾病相关的变化有灵敏的应答；5)在样品中有较长的半衰期；6)能快速准确地被检出。

就此而言，相比传统的标志物分子，体液中的循环miRNA具有如下优势：1)更稳定：循环miRNA在血浆、血清中的稳定性好，经过煮沸、反复冻融、强酸、强碱、DNA酶、RNA酶等多种极端条件的处理，其含量仍保持相对稳定；2)更敏感：研究发现某些miRNA在疾病早期已有变化，可预示疾病的发生，而且核酸体外扩增技术的发展使得低丰度分子的检测成为可能；3)更特异：miRNA具有组织表达和病理过程的特异性，不同疾病有各自特异的循环miRNA表达谱，而且基于碱基配对的序列特异性扩增避免了技术上的假阳性；4)更方便：相比蛋白类标志物检测需要筛选和制备特异性抗体，miRNA可以直接测定。