[发明专利]一种检测miRNA-217-5p的试剂在制备鸭肠道应激检测试剂中的用途

说明书

本发明提出一种检测miRNA‑217‑5p的试剂在制备鸭肠道应激检测试剂中的用途，包括miRNA，所述miRNA为miRNA(miRNA‑217‑5p)，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述miRNA的靶基因为样腱蛋白1(CHRDL1)，所述miRNA在氧化应激过程中高表达，通过下调的样腱蛋白1(CHRDL1)基因的表达，参与小肠上皮的氧化应激应答。本发明提出的miRNA(miR‑217‑5p)与鸭肠道氧化应激有很好的相关性，通过有效性和分子生物学验证，miR‑217‑5p的表达量在应激组和对照组样本间的差异极显著，且可以调节靶基因的表达，应用于抗逆蛋(肉)鸭的辅助遗传育种中，可实现早期辅助选择。

技术领域

本发明涉及分子标记领域，尤其涉及一种检测miRNA-217-5p的试剂在制备鸭肠道应激检测试剂中的用途。

背景技术

鸭是一种胆小、易惊的家禽。随着鸭规模化、设施化养殖的发展，蛋鸭笼养成为一种重要的生产方式，逐渐在蛋鸭生产中推广应用，在标准化笼养流程中，免疫、运输、上笼、环境温度变化等各种有害刺激，可使鸭生产性能降低，极大的影响养殖效率，有害刺激易诱发氧化应激反应。应激发生时，血液流向肌肉、脑等组织，小肠组织发生缺血，又最迟得到恢复，肠道持续缺氧造成氧化应激，不仅会影响肠道屏障和吸收功能，还可导致消化道黏膜的损伤，引发肠细菌异位，诱发多种疾病。

microRNA(miRNA)是一类长度约20-24nt的非编码单链小分子RNA，可以通过与靶基因mRNA的3’UTR互补结合对靶基因进行转录后调控，在细胞增殖、分化和凋亡、细胞氧化应激应答、肿瘤形成等生理过程中发挥重要的调控作用。

miRNA参与动物应激应答是通过结合靶基因mRNA的3’UTR进行负调控实现的。如果仅通过生物信息学分析预测，将得到大量互作基因，对其筛选和验证难度巨大。而通过同一组织，特定生理时期RNA-seq和miRNA-seq测序，并进行关联分析，会更加准确获得相应生理过程的功能miRNA及其靶向基因。因此，本发明提出一种检测miRNA-217-5p的试剂在制备鸭肠道应激检测试剂中的用途，以解决现有技术中的不足之处。

发明内容

针对上述问题，本发明提出的miRNA(miR-217-5p)与鸭肠道氧化应激有很好的相关性，通过有效性和分子生物学验证，miR-217-5p在应激组和对照组样本间的差异极显著，在应用于抗逆蛋(肉)鸭的辅助遗传育种中，可实现早期辅助选择，同时本发明提供的检测miR-217-5p表达水平的荧光定量PCR试剂盒包含了从RNA提取到荧光定量实验所需的整套试剂，即方便使用，又保证了结果的一致性。

本发明提出一种检测miRNA-217-5p的试剂在制备鸭肠道应激检测试剂中的用途，包括miRNA，所述miRNA为应激过程中上调的miRNA(miRNA-217-5p)，其核苷酸序列如SEQ IDNo.1所示，所述miRNA的靶基因为样腱蛋白1(CHRDL1)，所述miRNA通过下调的样腱蛋白1(CHRDL1)基因的表达，参与小肠上皮的氧化应激应答。

进一步改进在于：所述miRNA通过下调的样腱蛋白1(CHRDL1)基因的表达，在小肠上皮的氧化应激过程中发挥促进细胞增殖作用。

进一步改进在于：所述miRNA表达水平及其下调的样腱蛋白1(CHRDL1)基因的表达是通过RT-qPCR检测，根据鸭小肠组织中的所述miRNA的表达水平，判断鸭小肠抗氧化能力并进行筛选。

进一步改进在于：检测鸭小肠组织中的所述miRNA的表达水平，包括如下步骤：

步骤一：提取待测鸭小肠组织中含有miRNA的总RNA；

步骤二：设计目标miRNA和内参miRNA(U6)的特异性茎环引物，利用反转录酶进行miRNA反转录；

步骤三：采用miRNA特异的正向引物，以及通用下游引物，利用荧光定量PCR试剂盒进行miRNA(miRNA-217-5p)和内参miRNA的扩增；