[发明专利]鬼臼毒素的核酸适配体及其应用

说明书

本发明涉及一种核酸适配体，特别涉及能与鬼臼毒素特异性结合的核酸适配体以及利用该核酸适配体制作成的电化学生物传感器。本发明所述的鬼臼毒素的核酸适配体具有如SEQ ID NO.1所示的核酸序列。核酸序列的5’端具有巯基修饰基团。本发明所述的鬼臼毒素核酸适配体对底物鬼臼毒素具有特异性亲和力。本发明所述的核酸适配体组装在电极上，能够制成对鬼臼毒素响应灵敏的电化学生物传感器以及用于检测鬼臼毒素的试剂盒。本发明所述的核酸适配体具有分子量小、性质稳定、成本低廉、易于保存等优点，利用其制成的电化学生物传感器可用于定性定量检测鬼臼毒素，比传统检测方法更快速更灵敏更稳定，大大提高检测效率及成本。

技术领域

本发明涉及一种核酸适配体，特别涉及能与鬼臼毒素特异性结合的核酸适配体以及利用该核酸适配体制作成的电化学生物传感器。

背景技术

鬼臼毒素(Podophyllotoxin,PPT)，化学名称为5R-5,8,8a,9-四氢-9-羟-5-(3,4,5-三甲氧苯基)呋喃(3',4':6,7)萘并-[2,3-d]-1,3-间二氧杂环烯-6(5aH)-酮，分子式是C22H22O8，分子量大小是414.41Da。其熔点在114～118℃(泡沸)之间，其水合物熔点是114～118℃。干燥后其熔点是183.3～184.0℃，旋光度是-132.7°(氯仿)。23℃水中溶解度为120 mg/L，溶于乙醇、氯仿、丙酮、冰醋酸，热溶于苯。

鬼臼毒素是从小蘖科鬼臼属植物——华鬼臼(又称鸡苔素)的根和茎中提取到的木脂类抗肿瘤成份。为白色结晶性粉末，无嗅，有吸湿性。从华鬼臼中提取到的鬼臼毒素可以制成膏剂和酊剂。鬼臼毒素能有效抑制疱疹病毒，抑制细胞中期的有丝分裂，用于毒性性病。

鬼臼毒素针对尖锐湿疣、多发性浅表性上皮瘤病(如多发性浅表性或浸润性基底细胞上皮瘤，鳞状细胞上皮瘤和基底鳞状细胞上皮瘤)，前上皮瘤性角化病，脂溢性角化、日光性角化和射线角化病，幼年喉头乳头瘤、疣(寻常疣、丝状疣)有一定疗效。

鬼臼毒素因其具有良好的药用价值，逐渐成为了研究的热点，以其为主要成分的药物也越来越多。目前检测鬼臼毒素的手段不多，主要有高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱法(LC)、反相高效液相色谱(reveresed-phase HPLC)、色谱联用技术LC/MS)、酶联免疫法(ELISA)等。这些方法检出限低、精密度高，但操作复杂、检测成本高且不够快速，故开发一种简便的、价格低廉的、快速的检测手段定性定量检测药物或其他物质中的鬼臼毒素成为了一种紧急的需求。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种鬼臼毒素的核酸适配体，该核酸适配体对底物鬼臼毒素具有特异性亲和力，经等温滴定微量热实验表明，该核酸适配体可与鬼臼毒素进行特异性的结合。。

本发明所述的鬼臼毒素的核酸适配体具有如SEQ ID NO.1所示的核酸序列。SEQID NO.1：

5’-GGTGGGCACGTGCCTTCCCCGCCGGTCTCGTGCCCTTCGCTAGG-3’。

根据本发明所述的鬼臼毒素的核酸适配体的进一步特征，所述核酸序列的5’端具有巯基修饰基团。

优选的序列为：

5’-SHGGTGGGCACGTGCCTTCCCCGCCGGTCTCGTGCCCTTCGCTAGG-3’。

本发明的第二个目的在于提供一种电化学生物传感器，它能实现对鬼臼毒素的高灵敏度、高选择性的快速检测。

本发明所述的电化学生物传感器包括根据本发明所述的鬼臼毒素适配体。

根据本发明所述的电化学生物传感器的进一步特征，所述鬼臼毒素的核酸适配体偶联于丝网印刷电极表面。

本发明的第三个目的在于提供一种用于检测鬼臼毒素的试剂盒。