[发明专利]一种益生菌中乳酸菌的检测方法

说明书

本发明公开了一种益生菌中乳酸菌的检测方法，属于微生物制品的检测技术领域。该方法包括：（1）将待测样品加入到添加有BSAV的PBS缓冲液中，均质，制成样品匀液，待测样品与PBS缓冲液的用量比为1g:9mL；在样品匀液中加入乳糖溶液，经水浴、离心分离除去上清液后得到菌悬液；（2）向步骤（1）所得的菌悬液中加入乳酸菌免疫磁珠，经混合、振荡后于磁力架上静置分层，弃上层，对下层样品进行洗脱，在洗脱后的乳酸菌免疫磁珠中加入PBS缓冲液，振荡重悬磁珠，得到样品待测液；（3）将样品待测液培养、观察、检测。本发明缩短了对样品中乳酸菌的检测时间，提高了乳酸菌的检出率及检测结果的准确性，且检测灵敏度高。

技术领域

本发明属于微生物制品的检测技术领域，具体涉及一种益生菌中乳酸菌的检测方法。

背景技术

益生菌作为一类能够对宿主生理功能产生有益作用的活性微生物，具有调节肠道菌群、降低胆固醇、增强免疫力、缓解口腔疾病及情绪异常等作用，被广泛应用于食品领域、医药领域以及畜牧领域。近年来，对益生菌中乳酸菌及其制品的研发、生产和销售情况可以了解到乳酸菌菌在人体健康中起到的重要功效越来越受到研究人员和消费者的关注，乳酸菌主要包括双歧杆菌、嗜热链球菌和乳杆菌，对环境温度较为敏感，乳酸菌制品在保藏及运输过程中，可能会造成乳酸菌菌体失活，最终导致终产品中乳酸菌存活率下降的情况，故而，对终产品中乳酸菌的检测具有重要意义。

目前益生菌中乳酸菌的检测方法，主要依赖于传统的微生物学检测方法。传统的国标检测法至少3天才能出结果，培养时间较长、费时费力；此外，在实际检测过程中，检测环境不利于菌体生长及检测时间长等因素，使得乳酸菌的生物活性存在下降甚至死亡的情况，导致终产品中益生菌的检出率较实际样品中低。因此，需要一种快速检测乳酸菌的方法和手段。

发明内容

为解决背景技术中存在的技术问题，本发明的目的在于提供一种快速检测益生菌中乳酸菌的方法，以提高待测样品中益生菌的检出率。

基于上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种益生菌中乳酸菌的检测方法，包括以下步骤：

1)将待测样品加入到添加牛血清白蛋白（第五组份）（BSAV）的PBS缓冲液无菌均质袋中，均质，制成样品匀液，待测样品与PBS缓冲液的用量比为1g:9mL；将样品匀液混匀后再加入乳糖溶液，经水浴后得到样品菌液，对其离心分离除去上清液后得到菌悬液；

2)向骤1）所得的菌悬液中加入乳酸菌免疫磁珠，经混合、振荡后于磁力架上静置分层，弃上层，对下层样品用洗脱液洗脱，在洗脱后的乳酸菌免疫磁珠中加入PBS缓冲液，振荡重悬磁珠，得到样品待测液；所述乳酸菌免疫磁珠采用链霉亲和素修饰磁珠偶联生物素标记的乳酸菌抗体制得；

3)将样品待测液培养、观察、检测。

进一步地，所述乳酸菌为双歧杆菌、嗜热链球菌和乳杆菌的混合物；所述乳酸菌抗体为双歧杆菌抗体、嗜热链球菌抗体和乳杆菌抗体按照重量比4:3:3混匀后的混合物。

进一步地，步骤1）中，PBS缓冲液中BSAV的质量浓度为0.5%～5%；乳糖溶液与待测样品的体积比为（0.2～2）︰1，乳糖溶液的浓度为1%～20%。

进一步地，步骤1）中，所述水浴温度为35℃～50℃，水浴时间为3min；离心温度为4℃，离心转速为6000rmp，离心时间为1min～6min。

进一步地，步骤2）中，乳酸菌免疫磁珠的浓度为5mg/mL,乳酸菌免疫磁珠与样品菌液的体积比为1︰50，所述洗脱液为浓度为0.02mol/L的PBS缓冲液。

进一步地，步骤2）中，菌悬液与免疫磁珠混合后振荡的时间为0.5min～3min；所述静置时间为2min；所述洗脱次数为2～3次。

进一步地，所述乳酸菌免疫磁珠的制备方法，包括以下步骤：