[发明专利]Vγ9δ2T细胞识别与杀伤肺鳞状上皮细胞癌的新靶标抗原及其鉴别方法和应用

说明书

本发明涉及生物技术领域，具体而言，提供了一种Vγ9δ2T细胞识别与杀伤肺鳞状上皮细胞癌的新型靶标及其鉴别方法和应用。本发明提供的鉴别基于Vγ9δ2T细胞识别与杀伤肺鳞状上皮细胞癌的新型靶标的方法，靶标分子通过激光共聚焦显微镜方法鉴定肿瘤细胞表面的异位表达得到，针对靶标分子进行如下操作：检测Vγ9δ2T细胞对靶标分子封闭肿瘤细胞、靶标分子缺陷型肿瘤细胞和靶标分子过表达型肿瘤细胞的杀伤作用。该方法可以快速准确的得到Vγ9δ2T细胞识别与杀伤肺鳞状上皮细胞癌的新型靶标，这为了解Vγ9δ2T细胞的杀伤机制和肺鳞状上皮细胞癌的过继免疫治疗提供了新的思路和理论依据。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体而言，涉及一种Vγ9δ2T细胞识别与杀伤肺鳞状上皮细胞癌的新型靶标及其鉴别方法和应用。

背景技术

肺癌是世界上致死率最高的癌症，其中非小细胞性肺癌(NSCLC)约占肺癌总数的80％。肺癌的高发病率、高致死率及有效治疗手段的缺乏燃起了众多研究者对新型肺癌免疫治疗策略的探索。其中，免疫关节点抑制剂及基于杀伤性T细胞的免疫过继治疗策略近年来引起了广泛关注。

Vγ9δ2T细胞是人外周血γδT细胞的主要亚群(比例约为50-90％)，能以MHC非限制性方式识别表达在肿瘤细胞表面的应激性内源性蛋白质抗原，对多种血液肿瘤及实体肿瘤均有直接杀伤作用。然而，Vγ9δ2T细胞识别杀伤肺癌的分子机制目前尚不十分清楚，对于Vγ9δ2T细胞如何在肿瘤治疗中发挥更佳作用也缺乏更好的技术手段。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种鉴别基于Vγ9δ2T细胞识别与杀伤肺鳞状上皮细胞癌的新型靶标的方法，以缓解现有技术中缺少一种可以有效鉴定发现新型靶标的方法。

本发明的第二目的在于提供利用上述方法得到的新型靶标。

本发明的第三目的在于提供上述新型靶标在制备肺鳞状上皮细胞癌免疫过继治疗药物中的应用。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种鉴别基于Vγ9δ2T细胞识别与杀伤肺鳞状上皮细胞癌的新型靶标的方法，包括以下步骤：针对靶标分子进行如下a)-c)的操作：

a)检测Vγ9δ2T细胞对靶标分子封闭的肿瘤细胞的杀伤作用；

b)检测Vγ9δ2T细胞对靶标分子缺陷型的肿瘤细胞的杀伤作用；

c)检测Vγ9δ2T细胞对靶标分子过表达的肿瘤细胞的杀伤作用；

所述靶标分子通过激光共聚焦显微镜方法鉴定肿瘤细胞表面异位表达得到。

进一步地，a)和b)中所述的杀伤作用显著降低，所述靶标分子为Vγ9δ2T细胞识别与杀伤肺鳞状上皮细胞癌的新型靶标。

进一步地，c)中所述的杀伤作用显著提升，所述靶标分子为Vγ9δ2T细胞识别与杀伤肺鳞状上皮细胞癌的新型靶标。

进一步地，所述检测采用CytoTox96非放射杀伤试剂盒。

进一步地，所述靶标分子封闭的肿瘤细胞通过采用靶标分子抗体封闭肿瘤细胞上异位表达的靶标分子得到。

进一步地，所述肿瘤细胞包括GLC-82、NCI-H446或NCI-H520中的至少一种，优选为NCI-H520。

进一步地，所述靶标分子包括hMSH2。

进一步地，hMSH2缺陷型肿瘤细胞的构建包括采用siRNA转入肿瘤细胞干扰hMSH2基因表达的步骤。

上述方法得到的新型靶标。

上述新型靶标在制备肺鳞状上皮细胞癌免疫过继治疗药物中的应用；