[发明专利]一种经代谢调控后抗菌活性显著增加的杜仲内生真菌

说明书

一株经代谢调控后抑菌活性显著增加的杜仲内生曲霉菌（Aspergillus sp.），菌株GZWMJZ‑047，保藏号为CCTCC M 2018807。代谢调控增加杜仲内生菌抗菌活性的方法是在发酵培养基中添加杜仲叶并按照如下步骤实施：（a）种子液制备，将菌株接种在培养基中扩大培养制备种子液；（b）菌株的代谢调控的方法是在真菌液体培养基中添加杜仲叶，将种子液接种到配置好的真菌液体培养基中进行发酵；真菌液体培养基的成分及重量为：可溶性淀粉（10‑15克）、蛋白胨（1‑2克）、自来水1L、pH 6.5~7.5；真菌液体培养基添加杜仲叶的量为：杜仲干叶（1%‑2%）或者新鲜杜仲叶（5%‑10%），所添加的杜仲叶与发酵培养基一起灭菌使用。杜仲内生真菌GZWMJZ‑047通过在其发酵培养基中添加杜仲叶调控后，其发酵提取物的抗菌活性明显增加。

技术领域

本发明涉及的是一种代谢调控抗菌活性显著增加的杜仲内生真菌。

背景技术

目前，随着抗生素的滥用，病菌的耐药性急剧增加，已成为威胁人类生存的最严重的问题之一。抗生素的滥用不仅包括人类疾病的不合理使用，在养殖业中的滥用更是触目惊心，在养殖过程中使用了大量的人用抗生素，使得病原微生物与抗生素接触增加，大大提高了病原微生物产生耐药的几率。因此，开发养殖业专用的抑菌剂对抗生素的滥用能起到缓解作用。我们从杜仲内生菌中筛选得到一株曲霉菌（Aspergillus sp.），菌株编号为GZWMJZ-047，保藏号为CCTCC M 2018807。在发酵培养基中添加杜仲叶后，其发酵提取物对多种水产致病菌的抑制活性显著增加。

发明内容

本发明目的在于提供一种代谢调控后抗菌活性显著增加的杜仲内生菌，菌株GZWMJZ-047，菌株鉴定为曲霉菌（Aspergillus sp.），保藏号为CCTCC M 2018807，保藏日期为2018年11月21日，保藏单位为中国典型培养物保藏中心（CCTCC），地址为中国武汉。

本发明的目的是通过如下技术方案来完成的，一种经代谢调控后抗菌活性显著增加的杜仲内生菌，所述的代谢调控的方法包括如下步骤：

（a）种子液制备，将菌株接种在培养基中扩大培养制备种子液；

（b）菌株的代谢调控的方法是在真菌液体培养基中添加杜仲叶，将种子液接种到配置好的真菌液体培养基中进行发酵。

作为优选：所述的种子液培养基成分及重量为：甘露醇（15-25克）、麦芽糖（15-25克）、葡萄糖（5-10克）、谷氨酸钠（5-10克）、酵母浸膏（1-3克）、玉米粉（0.5-1克）、磷酸二氢钾（0.5-1克）、硫酸镁（0.3-1克）、自来水1L、pH 6.5~7.5。

作为优选，真菌液体培养基的成分及重量：可溶性淀粉（10-15克）、蛋白胨（1-2克）、自来水1L、pH 6.5~7.5。

作为优选，真菌液体培养基添加杜仲叶的量为：杜仲干叶（1%-2%）或者新鲜杜仲叶（5%-10%），所添加的杜仲叶与发酵培养基一起灭菌使用。

作为优选，真菌液体培养基进行培养和发酵温度均为28-35℃，培养和发酵时间均为20—30天。

具体实施方式：

将保藏于4℃的菌株GZWMJZ-047接到PDA固体培养基（葡萄糖20 g，琼脂粉20 g，马铃薯浸提液1000 mL）平板上，在恒温培养箱，28摄氏度下培养3天。然后从平板上挑取单菌落接种到装有150 mL 的种子液培养基【甘露醇（15-25克）、麦芽糖（15-25克）、葡萄糖（5-10克）、谷氨酸钠（5-10克）、酵母浸膏（1-3克）、玉米粉（0.5-1克）、磷酸二氢钾（0.5-1克）、硫酸镁（0.3-1克）、自来水1L、pH 6.5~7.5】的500 mL锥形瓶中，在28摄氏度的恒温震荡培养器中（180 rpm）培养4天，制备种子液。