[发明专利]一种副干酪乳杆菌冻干菌粉的制备方法

说明书

本发明公开了一种副干酪乳杆菌冻干菌粉的制备方法，属于益生菌发酵剂技术领域。该方法是收集副干酪乳杆菌的菌体，然后与冻干保护剂混合；冻干保护剂由脱脂奶粉，蔗糖，聚乙烯吡咯烷酮，谷胱甘肽和水制备而成；然后将菌体和冻干保护剂的混合溶液平铺在冻干器皿中进行预冻处理，待冻结完全后将预冻好的样品进行真空冷冻干燥处理。本发明制备方法所制得的副干酪乳杆菌的冻干菌粉中菌体的存活因子达0.998±0.001，活菌数为2.35×10¹¹cfu/g，活菌数含量高。为副干酪乳杆菌产品的开发及其在乳制品、食品、医药等方面提供了必要的技术支持。

技术领域

本发明涉及一种副干酪乳杆菌冻干菌粉的制备方法，属于益生菌发酵剂技术领域。

背景技术

副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)属于乳杆菌属中的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)群，广泛存在于奶酪、泡菜等发酵食品及人体胃肠道中，具有良好的耐酸及胆汁抗性，能降低血浆中胆固醇，具有促进人体肠道内病原体的清除、治疗肠道菌群紊乱从而防止食物过敏和急性腹泻、防止肿瘤产生等生理作用。

近年来，随着乳酸菌作用机制的不断研究，乳酸菌被广泛应用于食品行业、医药行业、轻工业及畜禽生产业等众多领域，这也促进了发酵剂种类的更新。目前制作乳酸菌发酵剂的方法有很多，主要有流化床干燥技术、喷雾干燥技术和真空冷冻干燥技术。其中流化床干燥技术是一种重要的包封技术，可以降低益生菌制剂的残留水分含量，但它不能用作益生菌的唯一干燥技术，通常与其他干燥技术(例如冷冻干燥或喷雾干燥)相结合使用，因此它的可用性有限。喷雾干燥技术处理量大，成本低，但进风温度和出口温度高，菌体存活率低，若降低温度，则容易出潮粉。真空冷冻干燥技术是将物料冻结到共晶点温度以下，在低压状态下，通过升华除去物料中水分的一种干燥方法。由于干燥过程中没有液态水，水分以固体状态就地升华，且在低温、低氧下进行，大多数生物反应停滞，使物料的原有结构和形状受到最小程度的破坏，保持菌种的形态、色泽，保存期长，储存运输、销售方便。

在真空冷冻干燥过程中，冷冻和干燥两个步骤会对微生物的活性造成不同程度的影响，如减少细胞数量、细胞活性和酶活力降低，抗逆性下降等。为了减少这两个过程对微生物造成的损伤，需要采取有效的措施。

发明内容

为解决现有冻干工艺对于副干酪乳杆菌的损伤较大导致冻干菌粉中菌活力低且活菌数少的问题，本发明提供了一种副干酪乳杆菌冻干菌粉的制备方法，该方法能够提高副干酪乳杆菌冻干存活因子及菌粉活菌数，采用的技术方案如下：

一种副干酪乳杆菌冻干菌粉的制备方法，该方法包括如下步骤：

步骤一：将副干酪乳杆菌活化后进行扩大培养，待培养至指数中期时取菌液收集菌体，将收集的菌体重悬于与其等体积的培养基中制备成菌悬液，将菌悬液置于4℃～20℃下进行预处理2h，再置于37℃培养箱中培养至稳定期，离心去上清后重悬于1/10所述菌悬液体积的PBS溶液中，获得浓缩菌悬液，再用无菌生理盐水洗涤两遍后离心收集菌体，得到菌泥。

步骤二：将菌泥与冻干保护剂混合；所述冻干保护剂由脱脂奶粉，蔗糖，聚乙烯吡咯烷酮，谷胱甘肽和水制备而成，调节冻干保护剂的pH至5.0～7.5；所述冻干保护剂与步骤一所述浓缩菌悬液的体积比为(1-3)：1；

步骤三：将步骤二所得菌体和冻干保护剂的混合溶液平铺在冻干器皿中使其在冻干器皿中的厚度为0.3cm～0.7cm，然后进行预冻处理，待冻结完全后将预冻好的样品进行真空冷冻干燥处理。

优选地，步骤一所述预处理是在15℃下预处理2h。

优选地，步骤二所述冻干保护剂中脱脂奶粉的质量浓度为10％-20％，蔗糖的质量浓度为10％-20％，聚乙烯吡咯烷酮的质量浓度为5％-9％，谷胱甘肽的质量浓度为0.7％-1.3％。