[发明专利]一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法

权利要求书

1.一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，其特征在于：包括如下步骤：

步骤1、环境释放养殖试验前，将用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖系统正常运行25～30天，检测系统运行参数、水体指标，检测合格后待用；

步骤2、选取规格为4～6g/尾的虹鳟鱼，禁食2日后，进行核酸疫苗背鳍基部肌肉注射免疫，免疫时将虹鳟鱼随机分为空白组和免疫组，注射后将虹鳟鱼放到用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖系统中的养殖池内；

步骤3、用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖系统总水量为10m³，循环养殖每天换水量为总量的10～20wt％，每天投饲量标准为虹鳟鱼体重的2％，分2～4次投喂，养殖密度为200～220尾/m³，养殖水温为11～16℃；

步骤4、免疫注射后，间隔一定时间对虹鳟粪便、水体分别进行采集，进行环境释放试验内容检测。

2.根据权利要求1所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，其特征在于：步骤1中用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖系统中具有生物过滤装置，所述的生物过滤装置为不锈钢外壳，其从上到下分为生物过滤层、陶瓷填料层、立体弹性滤料层、活性碳生物填料层，所述的生物过滤层为高为30-50cm的EPS生物球，所述的陶瓷颗粒厚度40～60cm，陶瓷颗粒的粒径为4～6mm，所述的立体弹性滤料层的厚度为30cm，所述的立体弹性滤料层为聚乙烯材质，弹性滤料单元直径80mm，比表面积300m²/m³，孔隙率大于99％，填料双侧用不锈钢网固定防止填料飘动，所述的活性碳生物填料层的厚度为30cm，粒径为2～4mm,所述的生物过滤装置的高度为1.5m。

3.根据权利要求1所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，其特征在于：步骤1中水体指标为悬浮物颗粒<2mg/l，水体pH为6.7～7.0。

4.根据权利要求1所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，其特征在于：步骤2中免疫组注射核酸疫苗的剂量为0.05ml/尾，空白对照组注射PBS缓冲溶液的剂量0.05ml/尾。

5.根据权利要求1所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，其特征在于：核酸疫苗中质粒的浓度在2～50μg/μL。

6.根据权利要求1所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，其特征在于：步骤3中投入的饲料为维生素0.1～0.15份，氯化胆碱0.05～0.1份，虾粉20～25份，豆粕35～40份，鱼粉25～30份，鱼油5～8份，紫苏叶提取物0.001～0.005份，艾叶提取物0.0001～0.0005份，菊花提取物0.0001～0.0005份。

7.根据权利要求7所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，其特征在于：步骤3中的维生素包括维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素E中的一种或几种的混合物。

8.根据权利要求1所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，其特征在于：免疫注射后虹鳟粪便、水体分别进行采集，每间隔5～7天采集一次。

9.根据权利要求1所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，其特征在于：环境释放检测包括虹鳟粪便的检测及水体的检测，虹鳟粪便的检测采用将湿重0.1g的粪便在无菌500μL磷酸缓冲盐溶液中进行充分搅拌，并在4℃放置30min，利用尼龙布过滤掉残渣，吸取过滤液涂布含有氨苄青霉素的LB平板，在20～30℃下倒置培养8～12h；水体的检测为将水体离心60～120s后，取底部浓缩液，涂布在含有氨苄青霉素的LB平板，在20～30℃下倒置培养8～12h。