[发明专利]蓝藻定量检测方法

说明书

本发明涉及一种蓝藻定量检测方法，测定样品中的藻蓝蛋白，依据测定的藻蓝蛋白浓度，推算出藻藻浓度，采用冻干破碎法进行样品中蓝藻的破碎，以进行藻蓝蛋白的提取，具体为将经‑20℃冷冻的样品，在预冷的冷冻真空干燥机中冻干，对蓝藻样品进行藻蓝蛋白提取，测定提取液的藻蓝蛋白荧光强度，依此计算藻蓝蛋白浓度，所用提取剂为去离子水，采用荧光分光光度计进行藻蓝蛋白荧光强度的测定，激发波长为620nm，发射波长为647nm。本发明所用蓝藻冻干破碎法降低了对藻蓝蛋白活性的影响，结果准确性高，具有良好的特异性，不仅适用于景观水体水华预警，也适用于易发生蓝藻水华的湖泊及其他场合。

技术领域

本发明涉及一种蓝藻定量检测方法，属环境监测和保护技术领域。

背景技术

再生水中营养盐含量较高，回用水景观容易爆发蓝藻水华，影响景观效果。通过对水体蓝藻生物量的检测，能够有效预测蓝藻水华的爆发，并及时采取控藻措施减缓水华爆发的强度或抑制水华爆发，维持水景观生态系统平衡。

目前国内外研究中，常通过蓝藻生物量对水华爆发强度进行判断，从而提出有效的控藻措施。

现有蓝藻生物量检测方法主要是显微镜计数法和叶绿素a测定法。

显微镜计数法：显微镜直接计数法是将少量待测样品的悬浮液置于血球计数板进行计数。在加样前，先对计数板进行镜检，如果有污物则需清洗吹干后才能进行计数；取1ml藻液于聚乙烯方瓶中，稀释50倍，用1％鲁哥试剂固定48小时后，用100ul移液枪吸取蓝藻样品，滴于计数板中央，盖玻片沿液滴边缘缓慢盖上，防止气泡产生；将计数板放在载物台的中间，先在低倍镜下找到计数室位置后，再转换成高倍镜观察、计数并记录。

叶绿素a测定法：采集的水样稀释一定比例后，取一定体积的稀释液经0.45μm GF/C过滤，过滤后的样品及滤膜用锡纸包裹避光冻融2-3次。将冻融后的样品置于玻璃离心管中，加10mL90％丙酮溶液后密封，4℃下避光提取24小时，期间将样品摇匀2-3次。提取完成后取上清液，通过紫外分光光度计进行检测。

上述两种检测方法，各有特色，分别适应于不同的场合，同时也就有一定的局限性或不足。例如，

显微镜计数法：蓝藻计数过程耗时较长，对人员的操作技巧要求较高；并且野外水华蓝藻多以藻团的形式存在，显微镜下，藻细胞重叠在一起难以辨认和计数，导致一些小的藻团和单藻的数量可能会被低估，在计数方面存在着显著的统计误差。

叶绿素a测定法：叶绿素a存在于所有的浮游植物中，并非蓝藻所特有，以叶绿素a的含量来计算蓝藻生物量误差较大。实验过程中的提取剂丙酮溶液，为易挥发、易制毒的有机溶液，操作过程中丙酮大量挥发影响实验结果准确性。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了一种蓝藻定量检测方法，这种方法准确性高，可重复性好，且便于操作。

本发明的技术方案是：一种蓝藻定量检测方法，测定样品中的藻蓝蛋白，依据测定的藻蓝蛋白浓度，推算出藻藻浓度。

优选地，采用冻干破碎法进行样品中蓝藻的破碎，以进行藻蓝蛋白的提取。

采用冻干破碎法进行样品中蓝藻的破碎的方式可以为：将经-20℃冷冻的样品，在预冷的冷冻真空干燥机中冻干。

优选地，对蓝藻样品进行藻蓝蛋白提取，测定提取液的藻蓝蛋白荧光强度，依此计算藻蓝蛋白浓度。

所用提取剂可以为去离子水。

可以采用荧光分光光度计进行藻蓝蛋白荧光强度的测定，激发波长为620nm，发射波长为647nm。