[发明专利]一种鸡血藤悬浮细胞的培养方法

说明书

本发明公开了一种鸡血藤悬浮细胞的培养方法，包括：步骤1)选取鸡血藤种子，消毒，放置于萌发液体培养基中进行萌发培养至其长出嫩叶；步骤2)选取嫩叶作为外植体，将其置于诱导固体培养基上进行诱导培养，获得愈伤组织；步骤3)将愈伤组织在继代固体培养基中进行继代培养至少二次，至其生长成为淡绿色的颗粒状的疏松的细胞团；步骤4)将细胞团转移至启动液体培养基中进行悬浮启动培养，获得悬浮细胞系；步骤5)将悬浮细胞系接种至增殖液体培养基中进行增殖培养，获得鸡血藤悬浮细胞系。本发明每升鸡血藤悬浮细胞中可提取到1.5～2g多糖。

技术领域

本发明涉及中药材栽培技术领域，尤其涉及一种鸡血藤悬浮细胞的培养方法。

背景技术

鸡血藤，中药名。为豆科植物密花豆Spatholobus suberectus Dunn的干燥藤茎。秋、冬二季采收，除去枝叶，切片，晒干。分布于广东、广西、云南等地。具有活血补血，调经止痛，舒筋活络之功效。用于月经不调，痛经，经闭，风湿痹痛，麻木瘫痪，血虚萎黄。随着研究的深入，科学家发现，鸡血藤提取物富含多糖等多种物质，具有明显的抗肿瘤作用，在医学上的需求量越来越大。野生鸡血藤植株的产量已经不能满足市场需求。为满足对该中药材的需求，近年来，逐渐采用人工栽培及组织培养的方式对鸡血藤进行培养。组织培养由于具有培养时间短、不占用耕地等优点，逐渐快速发展起来。然而，在组织培养中，由于培养时间较短，因此鸡血藤悬浮细胞中多糖等物质的含量较野生型少。如何在较短的时间内使得培养的鸡血藤植株中含有较多量的多糖，是目前正在积极探究的技术问题。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。

本发明还有一个目的是提供一种鸡血藤悬浮细胞的培养方法，包括：

一种鸡血藤悬浮细胞的培养方法，包括：

步骤1)首先选取鸡血藤种子，然后对所述种子进行消毒，最后将其放置于萌发液体培养基中进行萌发培养至其长出1～10mm长度的嫩叶，所述萌发液体培养基包含：1/4～1/2MS、蔗糖7～15g/L和6-BA0.1～0.3mg/L，其初始pH值为5.8；

步骤2)选取经过萌发培养长出的嫩叶作为外植体，将所述外植体置于诱导固体培养基上进行诱导培养，获得愈伤组织，所述诱导固体培养基包含：MS，6-BA0.2～0.5mg/L，NAA0.02～0.1mg/L，蔗糖10～15g/L、蜂胶5～10g/L、酵母提取物2～5g/L、质量分数2～10％的银杏叶汁液和琼脂8g/L；

步骤3)将所述愈伤组织在继代固体培养基中进行继代培养至少二次，至其生长成为淡绿色的颗粒状的疏松的细胞团，所述继代固体培养基包含：MS，6-BA0.5～1mg/L，NAA0.02～0.1mg/L，蔗糖5～10g/L、蜂胶15～20g/L、酵母提取物5～10g/L、质量分数5～15％的银杏叶汁液和琼脂8g/L；

步骤4)将所述细胞团转移至启动液体培养基中进行悬浮启动培养，获得悬浮细胞系，所述启动液体培养基包含：1/4～1/2MS、6-BA 0.2～0.6mg/L，NAA 0.02～0.1mg/L、蔗糖2～5g/L、蜂胶10～15g/L、酵母提取物2～5g/L和质量分数2～10％的银杏叶汁液；

步骤5)将所述悬浮细胞系接种至增殖液体培养基中进行增殖培养，获得鸡血藤悬浮细胞系，所述增殖液体培养基包含：1/2MS、6-BA0.5～1mg/L，NAA0.02～0.1mg/L、蔗糖2～5g/L、蜂胶10～15g/L、酵母提取物2～5g/L和质量分数2～10％的银杏叶汁液。

优选的是，所述的鸡血藤悬浮细胞的培养方法中，步骤1)中，所述萌发培养的培养条件为：光照强度800～1500lux，光周期8～12小时/日，培养温度为24～28℃，培养时间为7～15天。