[发明专利]一种生产牛大力多糖的方法

说明书

本发明公开了一种生产牛大力多糖的方法，包括：步骤1)选取鸡血藤种子，消毒，放置于萌发液体培养基中进行萌发培养至其长出嫩叶；步骤2)选取嫩叶作为外植体，将其置于诱导固体培养基上进行诱导培养，获得愈伤组织；步骤3)将愈伤组织在继代固体培养基中进行继代培养至少二次，至其生长成为淡绿色的颗粒状的疏松的细胞团；步骤4)将细胞团转移至启动液体培养基中进行悬浮启动培养，获得悬浮细胞系；步骤5)将悬浮细胞系接种至增殖液体培养基中进行增殖培养，获得鸡血藤悬浮细胞系。步骤6)将鸡血藤悬浮细胞系收集细胞，纯净水提取3次，合并三次提取液，离心，将沉淀干燥后得到牛大力多糖。

技术领域

本发明涉及中药材栽培技术领域，尤其涉及一种生产牛大力多糖的方法。

背景技术

鸡血藤，中药名。为豆科植物密花豆Spatholobus suberectus Dunn的干燥藤茎。秋、冬二季采收，除去枝叶，切片，晒干。分布于广东、广西、云南等地。具有活血补血，调经止痛，舒筋活络之功效。用于月经不调，痛经，经闭，风湿痹痛，麻木瘫痪，血虚萎黄。随着研究的深入，科学家发现，鸡血藤的根部，牛大力富含多糖等多种物质，具有明显的抗肿瘤作用，在医学上的需求量越来越大。野生鸡血藤植株的产量已经不能满足市场需求。为满足对该中药材的需求，近年来，逐渐采用人工栽培及组织培养的方式对鸡血藤进行培养。组织培养由于具有培养时间短、不占用耕地等优点，逐渐快速发展起来。然而，在组织培养中，由于培养时间较短，因此鸡血藤悬浮细胞中多糖等物质的含量较野生型少。如何在较短的时间内使得培养的鸡血藤悬浮细胞中含有较多量的多糖，是目前正在积极探究的技术问题。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。

本发明还有一个目的是提供一种生产牛大力多糖的方法，包括：

一种生产牛大力多糖的方法，包括：

步骤1)首先选取鸡血藤种子，然后对所述种子进行消毒，最后将其放置于萌发液体培养基中进行萌发培养至其长出1～10mm长度的嫩叶，所述萌发液体培养基包含：1/4～1/2MS、蔗糖7～15g/L和6-BA0.1～0.3mg/L，其初始pH值为5.8；

步骤2)选取经过萌发培养长出的嫩叶作为外植体，将所述外植体置于诱导固体培养基上进行诱导培养，获得愈伤组织，所述诱导固体培养基包含：MS，6-BA0.2～0.5mg/L，NAA 0.02～0.1mg/L，蔗糖10～15g/L、蜂胶5～10g/L、酵母提取物2～5g/L、质量分数2～10％的银杏叶汁液和琼脂8g/L；

步骤3)将所述愈伤组织在继代固体培养基中进行继代培养至少二次，至其生长成为淡绿色的颗粒状的疏松的细胞团，所述继代固体培养基包含：MS，6-BA 0.5～1mg/L，NAA0.02～0.1mg/L，蔗糖5～10g/L、蜂胶15～20g/L、酵母提取物5～10g/L、质量分数5～15％的银杏叶汁液和琼脂8g/L；

步骤4)将所述细胞团转移至启动液体培养基中进行悬浮启动培养，获得悬浮细胞系，所述启动液体培养基包含：1/4～1/2MS、6-BA 0.2～0.6mg/L，NAA 0.02～0.1mg/L、蔗糖2～5g/L、蜂胶10～15g/L、酵母提取物2～5g/L和质量分数2～10％的银杏叶汁液；

步骤5)将所述悬浮细胞系接种至增殖液体培养基中进行增殖培养，获得鸡血藤悬浮细胞系，所述增殖液体培养基包含：1/2MS、6-BA 0.5～1mg/L，NAA0.02～0.1mg/L、蔗糖2～5g/L、蜂胶10～15g/L、酵母提取物2～5g/L和质量分数2～10％的银杏叶汁液。