[发明专利]荧光探针化合物及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种荧光探针化合物及其制备方法和应用。该荧光探针化合物的结构式如下：当有万古霉素存在时，通过激发香豆素以及共振能量转移，可以观察到来自荧光素的荧光；当没有万古霉素时，荧光素的初始荧光很弱，主要是因为部分荧光素分子在中性水溶液中以没有荧光的闭环内酯形式存在。万古霉素与二肽结合，使得靠近二肽的荧光分子也被万古霉素的结合口袋包住，从而导致荧光分子的微环境变化。经过分子动力学模拟研究发现，上述机理可能是由于万古霉素和荧光素分子之间形成额外的氢键，稳定了开环的荧光形式。该荧光探针化合物在万古霉素检测时，灵敏度高，检测结果准确可靠。

技术领域

本发明涉及荧光成像检测领域，尤其是涉及一种荧光探针化合物及其制备方法和应用。

背景技术

众所周知，万古霉素(Vancomycin，简称Van)是一种糖肽类抗生素，通过与肽聚糖前体的D-Ala-D-Ala二肽(D-Ala：D-丙氨酸)结合来抑制细菌细胞壁的合成。Van通常用于治疗由革兰氏阳性菌(甲氧西林耐药株)引起的严重感染，并被认为是革兰氏阳性菌感染的“最后一道防线”。在体内，Van不易被代谢，常以原结构出现在尿液中，临床中较高剂量的Van会导致肾脏毒性。此外，Van和其他肾毒性药物之间也存在协同作用，导致肾小球损害。由于Van的毒性问题，医院通常需要对Van的用药剂量进行监测。另一方面，环境中残留的抗生素往往会导致抗药性细菌的产生，因此在水体等环境中对Van进行检测也非常重要。

目前已经报道的Van检测方法包括高效液相色谱(HPLC)法、基于ELISA的免疫测定法、放射免疫测定法、毛细管色谱法和光学方法等。其中，基于荧光的光学方法因其操作简单且易于可视化而引起了极大的关注。荧光偏振免疫分析法是最早用于Van测定的光学方法之一，早在几十年前就被开发出来且目前仍在使用。然而，该方法涉及抗体的制备和使用，操作复杂且成本较高。受Van抗菌机理的启发，Van和D-Ala-D-Ala短肽之间独特而强大的相互作用已被用于细菌和Van的检测等新技术的开发。然而，这些技术仍然存在一些缺点，例如单荧光信号输出可能导致结果不准确，并且检测高度依赖于探针浓度等。因此，发展高灵敏度且易于操作的检测产品和方法，在体液或体外环境中对Van进行定量具有迫切的需求。

发明内容

基于此，有必要提供一种荧光探针化合物及其制备方法和应用，以解决传统的荧光法检测Van时存在的灵敏度低、准确性差等问题。

一种荧光探针化合物，结构式如下：

其中，D-Ala是D-丙氨酸，L-Lys是L-赖氨酸，Linker是具有氨基和羧基的间隔基团，n为0或1，Coumarin是香豆素，F是荧光素。

在其中一个实施例中，所述荧光素是5-异硫氰酸酯。

在其中一个实施例中，所述荧光探针化合物的结构式是：

在其中一个实施例中，所述荧光探针化合物结构式是：

一种荧光探针化合物的制备方法，包括如下步骤：

合成短肽化合物(D-Ala)—(D-Ala)—(L-Lys)—(Linker)_n，其中，D-Ala是D-丙氨酸，L-Lys是L-赖氨酸，Linker是具有氨基和羧基的间隔基团，n为0或1；

将香豆素加入短肽化合物(D-Ala)—(D-Ala)—(L-Lys)—(Linker)_n中，进行缩合反应，生成化合物(D-Ala)—(D-Ala)—(L-Lys)—(Linker)_n—Coumarin，Coumarin是香豆素；

将化合物(D-Ala)—(D-Ala)—(L-Lys)—(Linker)_n—Coumarin与荧光素反应生成具有如下结构的荧光探针化合物：