[发明专利]一种通用型H5亚型禽流感亚单位疫苗及其制备方法

说明书

本发明提供一种通用型H5亚型禽流感亚单位疫苗及其制备方法，属于基因工程领域。该通用型H5亚型禽流感亚单位疫苗中抗原为氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的蛋白。本发明通用型H5亚型禽流感亚单位疫苗具有广谱性，能与H5亚型禽流感不同分支病毒阳性血清发生特异性反应，免疫效力试验表明该抗原安全、无不良反应，可诱导机体产生与商品苗相似的抗体水平，具有较好的免疫效果。

技术领域

本发明属于基因工程领域，具体涉及一种通用型H5亚型禽流感亚单位疫苗及其制备方法。

背景技术

H5亚型禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）是危害我国养禽业发展的重要传染病，给养禽业造成了严重的经济损失。目前，在流感病毒编码的蛋白中，以HA蛋白研究最为深入，HA蛋白以三聚体形式存在于病毒粒子表面，HA蛋白包含表面抗原决定簇，其在病毒抗原性、病毒入侵及激发机体产生保护性抗体等方面起着决定性作用，因而成为疫苗研制的重要靶蛋白。

目前，我国防控H5亚型禽流感的主要手段依然是免疫接种。传统灭活疫苗虽然能给家禽提供有效的免疫保护，但同时也存在诸多不足。首先流感病毒抗原易发生变异，由于传统灭活疫苗不具有广谱性，对变异毒株缺乏有效的保护，需经常更换毒株；其次，传统灭活疫苗采用强毒灭活，灭活工艺不严谨常常会导致活毒的污染，生物安全性较低。

因此，急需开发一种高效、通用型H5亚型禽流感亚单位疫苗来弥补这些不足。但是，现有技术中缺少有效的通用型H5亚型禽流感亚单位疫苗。

发明内容

本发明的目的是提供一种高效、通用型H5亚型禽流感亚单位疫苗，为H5亚型禽流感的防控提供更好的预防和控制效果。

为实现上述发明目的，本发明采用如下技术方案：

一种通用型H5亚型禽流感亚单位疫苗，所述疫苗中抗原为氨基酸序列如SEQ IDNO:2所示的蛋白。

在本发明中，通过培养携带所述蛋白编码基因的重组杆状病毒制备所述疫苗抗原。

优选的技术方案中，所述蛋白编码基因的序列如SEQ ID NO:1所示。

在本发明中，所述重组杆状病毒采用如下方法构建：在SEQ ID NO:1的5’端添加kozak序列，3’端添加Leu zip序列，然后插入杆状病毒转移载体pFastBac1中，得到重组杆状病毒转移质粒；将所述重组杆状病毒转移质粒转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞，获得重组杆状病毒穿梭质粒；将所述重组杆状病毒穿梭质粒转染昆虫细胞Sf9，获得表达所述抗原的重组杆状病毒。

优选的技术方案中，采用High Five细胞培养所述重组杆状病毒。

优选的技术方案中，将所述抗原灭活，加入其体积4%的吐温-80，乳化，得到水相；将96体积份白油和4体积份司本-80混合均匀，得到油相；将水相和油相按照体积比1:3混合、乳化，得到所述疫苗。

优选的技术方案中，采用甲醛灭活所述抗原。

本发明通用型H5亚型禽流感亚单位疫苗具有广谱性，能与H5亚型禽流感不同分支病毒阳性血清发生特异性反应，免疫效力试验表明该抗原安全、无不良反应，可诱导机体产生与商品苗相似的抗体水平，具有较好的免疫效果。将本发明通用型H5亚型禽流感亚单位疫苗中的抗原基因，克隆进杆状病毒表达系统（Invitrogen），就能够获得该抗原，制备方法简单、高效。

附图说明

图1显示间接免疫荧光鉴定结果，（A）重组HAs杆状病毒感染的Sf9细胞荧光示意图；（B）野生杆状病毒感染的Sf9细胞荧光示意图。

图2显示Western-blot鉴定结果，M:蛋白分子量标记；泳道1，2：重组HAs蛋白；泳道3：阴性对照。