[发明专利]水稻SNB基因及应用、调控籽粒大小的方法

权利要求书

1.一种水稻种子的SNB基因的应用，其特征在于：所述SNB基因的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。

2.根据权利要求1所述的SNB基因，其特征在于，所述的SNB基因EAR位点进行人工突变形成SNBm1基因，所述SNBm1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

3.根据权利要求2所述的SNB基因，其特征在于，所述SNB基因EAR位点人工突变的SNBm1基因的应用是以引物SNBm1F和SNBR组合，利用SNB基因编码区cDNA为模板进行PCR扩增，并回收该PCR产物，其中：

SNBm1F：ATGGTGATGGATATCAATGTGGAGTCGCC；

SNBR: TCAGGCGGTCGGGGGGAAGTAG。

4.根据权利要求1所述的SNB基因，其特征在于，SNBm2基因全长编码cDNA为截取SNB基因3’端1071bp长度的突变基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。

5.根据权利要求4所述的SNB基因，其特征在于，所述截取SNB基因3’端的人工突变的SNBm2基因的应用是以引物SNBm2F和SNBR组合，利用SNB基因编码区cDNA为模板进行PCR扩增，并回收该PCR产物，其中：

SNBm2F：ATGCCGATGCCGGCGGCGGCTGGG

SNBR: TCAGGCGGTCGGGGGGAAGTAG。

6.根据权利要求1所述的SNB基因，其特征在于，所述SNB基因第一外显子序列第400-500bp区域插入或缺失，该突变使基因翻译提前终止，形成SNB基因的突变体knSNB基因，所述的knSNB基因的第一外显子核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示。

7.根据权利要求5所述的SNB基因的应用，其特征在于，所述水稻SNB基因引导RNA靶点序列引物在编辑水稻基因组中的应用是以OsSNB基因诱导RNA的核苷酸序列为SNB-sgRNA:GCTCTTCCCTTCGCCGTCTGCGG。

8.根据权利要求5所述的SNB基因的应用，其特征在于，所述应用包括添加接头利用PCR扩增的方法构建权利要求4所述的引导RNA靶点序列的sgRNA表达盒；

将sgRNA表达盒装载到CRISPR/Cas9载体上，得到含靶点序列的CRISPR/Cas9-sgRNA载体；

将靶点CRISPR/Cas9-sgRNA载体转化水稻愈伤组织，得到水稻SNB基因突变体knSNB植株。

9.一种包含权利要求1-8任一所述SNB基因的应用，其特征在于，所述应用可用于调节水稻种子的大小。

10.一种水稻种子的OsSNB基因，其特征在于，所述OsSNB基因用于调控水稻种子的大小。

11.一种权利要求10所述的OsSNB基因突变体编码的蛋白质，其特征在于，所述OsSNB基因突变体编码的蛋白质可调控水稻种子得大小。

12.一种生产水稻种子大小改变的转基因植物的方法，其特征在于：

该方法包括以下步骤：

1）将权利要求1、2、4和6中任一所述的SNB基因、突变基因及其基因编辑可操作地连接于植物表达调控序列，形成植物表达载体；

2）将步骤1）所得的植物表达载体转入植物细胞；

3）经筛选获得的转化细胞，再生为植物及其后代，所述的植物包括植物细胞、植物组织或植物种子。