[发明专利]一种重组嵌合膜蛋白细胞株及其应用

说明书

本发明提供了一种重组嵌合膜蛋白细胞株及其应用，具体地，本发明提供一种嵌合SIRPα蛋白受体，包括细胞外结构域、任选的绞链区、跨膜结构域、和细胞内结构域；其中，所述细胞外结构域包括SIRPα胞外结构域。本发明还提供了工程细胞株，该细胞株的基因组中整合有表达外源的嵌合SIRPα蛋白受体(CSR分子)的表达盒，并且，所述细胞株不表达CD47。本发明的细胞株可用于筛选针对CD47或SIRPα特异性分子药物，并且具有稳定性好、靶点特异性高等特点。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种重组嵌合膜蛋白细胞株及其应用。

背景技术

SIRPα是信号调节蛋白家族(signal regulatory proteins,SIRPs)中典型的抑制性受体，可与体内广泛存在的跨膜糖蛋白CD47相互作用，传递抑制性信号。

由于CD47广泛表达于多种肿瘤细胞，肿瘤细胞可通过CD47-SIRPa信号通路逃逸巨噬细胞的免疫监视。因此通过CD47抗体或受体阻断CD47与SIRPa的结合可以激活巨噬细胞对肿瘤的吞噬作用，以及DC细胞的抗原递呈作用。

近年来针对CD47靶点药物的开发越来越得到医药研发领域的重视，有关其在细胞水平上的生物学活性分析又是必不可少的。传统的分析方法通过淋巴细胞分离液从人的外周血分离外周血单个核细胞(PBMC)，进一步采用磁珠分选方式获取单核细胞，再通过长时间的刺激、培养使其分化为巨噬细胞，才能将其用于研究CD47靶向药促进吞噬肿瘤细胞能力的检测。该方法可操作性低、周期长、成本高、通量低、且不能用于今后药物的放行检测。

因此，本领域迫切需要开发一种重组嵌合膜蛋白细胞株，用于筛选针对CD47或SIRPα特异性分子药物。

发明内容

本发明的目的在于提供一种重组嵌合膜蛋白细胞株，用于筛选针对CD47或SIRPα特异性分子药物。

本发明的第一方面，提供了一种嵌合SIRPα蛋白受体，所述嵌合SIRPα蛋白受体包括细胞外结构域、任选的绞链区、跨膜结构域、和细胞内结构域；其中，所述细胞外结构域包括SIRPα胞外结构域。

在另一优选例中，所述嵌合SIRPα蛋白受体(CSR)包含从N端到C端的SIRPα胞外结构域、绞链区、跨膜结构域、和细胞内结构域。

在另一优选例中，所述细胞内结构域包括CD28的胞浆信号传导序列、和/或CD3ζ的胞浆信号传导序列。

在另一优选例中，所述细胞内结构域还包括共刺激信号传导区。

在另一优选例中，所述嵌合SIRPα蛋白受体具有式I结构：

L-Z1-H-Z2-Z2’-Z3 (I)

式中，

各“-”独立地为连接肽或肽键；

L为无或信号肽序列；

Z1为SIRPα胞外结构域；

H为无或铰链区；

Z2为跨膜结构域；

Z2’为CD28的胞浆信号传导序列或任选的共刺激信号传导区；

Z3为源于CD3ζ的胞浆信号传导序列。

在另一优选例中，所述SIRPα胞外结构域选自下组：

(a)如SEQ ID NO:2氨基酸序列的蛋白；

(b)将SEQ ID NO:2氨基酸序列经过一个或多个(如1-10个)氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，且具有(a)蛋白功能的由(a)衍生的蛋白；或