[发明专利]一种半夏种苗组培生产方法

说明书

本发明提供一种半夏种苗组培生产方法，包括以下步骤：外植体选择胚状体诱导培养；球茎半固体培养基培养，与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：可诱导外植体直接分化出胚状体，还可诱导胚状体直接形成离体球茎，工艺简单合理，培养基配制方便，诱导率高，繁殖力强，球茎移栽成活率高，不需特殊驯化即可直接栽培或贮藏，实现了与半夏种苗生产与人工大规模栽培的对接，具有较大的生产应用价值。

技术领域

本发明是一种半夏种苗组培生产方法，属于一种中药组织培养方法。

背景技术

半夏以球茎入药，具有燥湿化痰、降逆止咳、消肿散结、抗早孕、抗肿瘤等多种功效，是我国特有的一种大宗传统中药材。随着药理研究的深入，半夏的市场需求量越来越大。半夏一直以野生资源为主，由于人们过度采挖和土地的精细耕作，使得野生半夏资源近乎枯竭。尽管半夏已经推广人工栽培，但由于长期采用小球茎作为种球，导致病毒感染不断积累在球茎中，造成半夏产量和药用成分极不稳定的现象。为了解决半夏资源保护和市场需求的矛盾，我国对半夏组培快繁技术的研究和应用已迅速展开。常见的半夏组织快繁体系是通过外植体诱导愈伤组织、愈伤组织分化出苗、继代增殖、生根、炼苗训化、组培苗移栽等环节，程序繁琐，而且移栽成活率不高。组织培养中的胚状体具有可发芽、不可生根的特点，所以不用生根就能获得完整植株，而且还有繁殖速度快等优点，已经广泛应用于生产实践。在适宜的组培条件下，半夏外植体诱导形成的离体球茎外形、大小均匀。另外，离体球茎还可直接作为繁殖材料应用于生产，节约了原种，大大缩短大田生长周期，避免了种球远程运输和贮存过程中存在的种种问题，具有较广阔的应用前景。通过检索发现，半夏报道的胚状体诱导率一般都只在50%-60%。

在CN102160523A专利中，用适宜浓度的灵发素可使半夏叶柄的胚状体诱导率提高80～100%，但没有离体球茎的形。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明目的是提供一种半夏种苗组培生产方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为了实现上述目的，本发明是通过如下的技术方案来实现：一种半夏种苗组培生产方法，包括以下步骤：

外植体选择；

胚状体诱导培养；

球茎半固体培养基培养。

进一步地，外植体选择的具体步骤为：选择半夏嫩叶柄并切出伤口备用。

进一步地，胚状体诱导培养的具体步骤为：制作胚状体诱导培养基，所述胚状体诱导培养基为MS+6-BA 0.1-1mg/L+IBA 0.1-1mg/L+糖30%，将半夏嫩叶柄切断为长0.8～1.2cm的继代扩繁材料，接种在胚状体诱导培养基中，23°C～27°C、光照1200Lx、12h/d条件下培养20天，稀释为500倍液液体培养基喷雾培养，每6小时开启0.5小时。

进一步地，球茎半固体培养基培养的具体步骤为：配制球茎半固体培养基为：MS+糖30%+6-BA0.1-1mg/L+NAA1-1 mg/L，将所得的胚状体接种于球茎半固体培养基中，23°C～27°C，室内自然光照条件下培养40天，胚状体就长成一粒粒的离体球茎。

进一步地，在将半夏嫩叶柄切断后需灭菌处理，所述灭菌处理为取叶柄用0.1％升汞灭菌15分钟，无菌水冲洗5次，或经75％的酒精浸泡 0.5～1min，再用2％的次氯酸钠水溶液消毒15min。

进一步地，MS+糖30%采用2-3倍配方，经验证该浓度提高后可加快半夏组培种新芽长势好，球茎增长速度。

本发明的有益效果：本发明的一种半夏种苗组培生产方法，可诱导外植体直接分化出胚状体，还可诱导胚状体直接形成离体球茎，工艺简单合理，培养基配制方便，诱导率高，繁殖力强，球茎移栽成活率高，不需特殊驯化即可直接栽培或贮藏，实现了与半夏种苗生产与人工大规模栽培的对接，具有较大的生产应用价值。

具体实施方式