[发明专利]一种磁微粒化学发光产品的制备方法

说明书

本发明公开了一种磁微粒化学发光产品的制备方法，首先将磁珠原液加入到缓冲溶液中，混匀后磁铁分离，弃上清备用；用缓冲溶液配制多聚糖溶液，加入高碘酸钠进行反应；待反应结束，加入EDC溶液和NHS溶液，混合均匀后将第一步洗涤过的磁珠加入，继续反应；将反应溶液进行磁铁分离，弃上清后加入缓冲溶液对磁珠进行洗涤；在洗涤后的磁珠中加入缓冲溶液和包被活材，混匀反应；磁铁分离弃除上清后，加入封保液振荡反应；磁铁分离后，将磁珠定容到磁珠封保液中，制备工作完成，2~8℃保存。本发明方法修饰的磁珠表面的羧基密度高，活性位点较多，并且羧基活性高、偶联效率高、抗原抗体包被量多，能够有效提高磁珠分散性、灵敏度和检测范围。

技术领域

本发明涉及体外诊断试剂，尤其是涉及一种磁微粒化学发光产品的制备方法。

背景技术

磁微粒化学发光产品（磁性微球）是基于化学发光免疫分析技术开发的一类体外诊断试剂，具有检测超微量活性物质的功能。羧基和氨基是两种常用的修饰磁性微球的活性基团。一定条件下，通过中间体活化，可与抗体或抗原上的氨基或羧基偶联。其中，氨基修饰的磁性微球表面的氨基活性较好，很容易与抗体或抗原进行化学偶联。在使用戊二醛过程中，戊二醛作为空间臂对磁珠表面的氨基和抗体或抗原表面的氨基进行偶联，可获得很高的包被量。但该方法活化阶段常常生成不稳定的席夫碱，还需要添加还原剂如硼氢化钠或氰基硼氢化钠，这常常会引起蛋白等变形失活，同时戊二醛也会导致磁珠和抗体或抗原发生自身交联，导致磁珠、蛋白内部交联，不利于抗原抗体的包被。

目前，国内的纳米微球修饰技术也在逐步展开，也就是说在纳米微球表面包覆涂层，经过修饰、改性磁珠表面的功能和性质，然后进行偶联抗原抗体。

常见的包覆涂层有二氧化硅，但二氧化硅修饰常常引入新的问题，二氧化硅本山带有负电荷，常常会吸附带正电荷的蛋白产生非特异性吸附。多糖类修饰磁珠，可显著改善磁珠的生物相容性，改善磁珠的亲水性，其表面的羟基可做进一步的修饰，如琼脂糖、葡聚糖等等，越来越受到更多人的青睐。

目前，在磁微粒包被CA199单克隆抗体的工艺中，羧基磁珠经过EDC、NHS活化并与CA199单克隆抗体进行连接，直接使用封保液进行封闭和保存，该工艺表现为磁珠包被CA199单克隆抗体的效价较低，且磁珠分散性、灵敏度和检测范围较差。

发明内容

本发明的目的在于提供一种磁微粒化学发光产品的制备方法，该方法利用多聚糖对磁珠进行修饰，可显著改善磁微粒的抗板结能力，进而可大大提升磁微粒化学发光试剂盒的检测范围。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

本发明所述的磁微粒化学发光产品的制备方法包括下述具体步骤：

第一步，将磁珠原液加入到缓冲溶液中，混匀后磁铁分离，弃上清备用；

第二步，用缓冲溶液配制多聚糖溶液，加入高碘酸钠进行反应；

第三步，待第二步反应结束，加入EDC溶液和NHS溶液，混合均匀后将第一步洗涤过的磁珠加入，继续反应；

第四步，将第三步的反应溶液进行磁铁分离，弃上清后加入缓冲溶液对磁珠进行洗涤；

第五步，在第四步洗涤后的磁珠中加入缓冲溶液和包被活材，混匀反应；

第六步，磁铁分离弃除上清后，加入封保液振荡反应；

第七步，磁铁分离后，将磁珠定容到磁珠封保液中，制备工作完成，2~8℃保存。

本发明所用缓冲溶液为磷酸盐、碳酸盐、吗啉乙磺酸、DMF、DMSO、甲醇、乙醇溶液中的一种。

本发明所用多聚糖溶液的浓度为0.5~5%；其中多聚糖为葡聚糖、果糖、纤维素、透明质酸、壳聚糖中的一种。