[发明专利]人源脂肪干细胞来源的神经元前体细胞及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种诱导培养基、采用该培养基诱导培养人源脂肪干细胞分化为神经元前体细胞，包括NEAA、β‑巯基乙醇、谷氨酰胺、生长因子和神经营养因子，所述NEAA与β‑巯基乙醇的体积比为4:1‑13:1，所述NEAA与谷氨酰胺的体积比为1:2‑2:1，所述生长因子由10‑20ng/mL的bFGF和10‑20ng/mL的EGF组成，所述神经营养因子由10‑20ng/mL的BDNF、10‑20ng/mL的NGF和10‑20ng/mL的NT3组成。本发明人源脂肪干细胞来源的神经元前体细胞群通过特定的诱导培养基诱导人源脂肪干细胞分化而得，神经元前体细胞健康状况好，活性及纯度高。

技术领域

本发明涉及干细胞及生物医药技术领域，尤其涉及人源脂肪干细胞来源的神经元前体细胞、制备方法及其在治疗神经系统疾病方面的应用。

背景技术

人源脂肪干细胞(Human-Adipose Derived Adult Stemcell,hADSC)，因其易于取材，体外培养老化率低，低免疫原性，生物安全性高，不涉及伦理问题等优势，已成为最有前景的细胞来源之一。脂肪干细胞向神经分化是其向临床转化治疗神经系统疾病的关键一步。目前，诱导脂肪干细胞向神经分化的方案有化合物法、基因重编程法。化合物法的弊端是化合物对细胞的毒副作用，影响分化获得神经细胞的健康状况，同时化合物法具有无序性和低效性。基因重编程法，虽然具有针对性和高效性，但基因及基因载体的选择是个难度较大的问题。

目前，通过诱导脂肪干细胞分化成的神经细胞健康状况欠佳，诱导获得的神经细胞得率不高，而且会伴有细胞的坏死和凋亡现象，影响后续临床上的应用。

另外，由脂肪干细胞诱导获得的神经元的分类定性存在欠缺，诱导分化后获得的细胞仍然是个复杂的细胞群体，无法根据临床要求制备特定的神经元或前体细胞。

如何通过诱导脂肪干细胞获得健康状况和活性较好、纯度较高的神经元前体细胞成为目前亟待解决的问题。

发明内容

为了解决现有的脂肪干细胞诱导的神经元样细胞健康状况欠佳，得率、纯度及活性较低的问题，本发明的目的是提供人源脂肪干细胞来源的神经元前体细胞、制备方法及其在治疗神经系统疾病方面的应用。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明的第一方面，提供一种诱导培养基，包括NEAA、β-巯基乙醇、谷氨酰胺、生长因子和神经营养因子，所述NEAA与β-巯基乙醇的体积比为4:1-13:1，所述NEAA与谷氨酰胺的体积比为1:2-2:1，所述生长因子由10-20ng/mL的 bFGF和10-20ng/mL的EGF组成，所述神经营养因子由10-20ng/mL的BDNF、 10-20ng/mL的NGF和10-20ng/mL的NT3组成。

本发明的第二方面，提供采用上述诱导培养基将人源脂肪干细胞分化成神经元前体细胞的方法，包括以下步骤：

S1，向超低吸附培养皿中加入诱导培养基后，注入脂肪干细胞，对脂肪干细胞进行诱导培养；

S2，收集成球生长的悬浮脂肪干细胞，洗掉血清后进行消化处理，处理后的细胞悬浮于诱导培养基中继续培养，获得神经元前体细胞。

本发明的第三方面，提供采用上述方法制备的神经元前体细胞群。

本发明的第四方面，提供人源脂肪干细胞来源的神经元前体细胞群的用途，在用于制备治疗神经系统疾病的药物上的应用。

其中，所述神经系统疾病包括阿尔茨海默，帕金森，中风，急性脑损伤和自闭症。

本发明的第五方面，提供一种药物组合物，包含上述的人源脂肪干细胞来源的神经元前体细胞群和药学上可接受的载体，所述人源脂肪干细胞来源的神经元前体细胞群的存在量足以在给予患者所述人源脂肪干细胞来源的神经元前体细胞群后促进神经系统的功能恢复。