[发明专利]一种红外光谱检测技术用于克罗恩病鉴别诊断的制样方法

说明书

本发明公开了一种红外光谱检测技术用于克罗恩病鉴别诊断的制样方法，使用具有金属镀层的玻璃片作为捞片过程的载具和红外吸收光谱测试的样品架，组织样品的石蜡切片在完成脱蜡过程后进行红外吸收光谱测试；本发明红外光谱检测技术用于克罗恩病鉴别诊断的制样方法，玻璃样品架金属镀层的设计能降低样品架的成本，同时金属镀层对红外光线基本无吸收，采用蒸发镀的过程中通过调节工艺改变镀层表面的粗糙度，方便组织切片在镀层上的粘附；脱蜡工艺的优化降低石蜡残留对红外吸收谱干扰。

技术领域

本发明涉及生物医学领域，尤其涉及一种红外光谱检测技术用于克罗恩病鉴别诊断的制样方法。

背景技术

克罗恩病(Crohn＇s disease，CD)是一种病因尚不十分清楚的胃肠道慢性非感染性肉芽肿性疾病检出率低，鉴别诊断困难。肠结核(intestinal tuberculosis，TB)是结核分枝杆菌引起的肠道慢性特异性感染。克罗恩病与肠结核的鉴别诊断往往需要结合临床表现、内镜、组织学和影像学进行综合分析。在临床实践中，肠结核和克罗恩病(CD)的鉴别十分重要。目前临床尚无有效的手段鉴别肠结核和克罗恩病，误诊率达到50％-70％，为临床医生诊疗带来巨大困难。

傅里叶变换衰减全反射中红外光谱检测技术具有检测速度快，检测准确率高、对测试样品无害等众多优点，已被广泛应用于各个检测领域。其分析依据是光照射到物质表面，引起物质分子基频振动的变化，不同物质在中红外波段(4000-400cm^-1)有不同的吸收，通过变化的信息，可以对物质进行定性、定量分析。

胃肠道组织中除水之外，主要包含蛋白质、脂质、糖类等有机化合物。这些物质都有很强的红外活性。如蛋白质在中红外波段的特征吸收主要为：酰胺羰基C＝O伸缩振动又称为酰胺I带(1685-1630cm^-1)和R-CONH₂分子中的NH₂变角振动称为酰胺II带(1640-1600cm^-1)。不同的疾病会引起组织中这些成分比例发生变化，中红外的吸收也会产生变化。综上所述，克罗恩病可通过中红外吸收光谱来进行鉴别。

对组织的检测需进行切片研究，其典型步骤为取组织材料、固定液浸泡、水洗、脱水、浸蜡、切片、捞片、烤片，最后进行红外吸收光谱测试。一般采用玻璃样品架进行捞片操作，同时也作为最终的测试样品架。不采用溴化钙之类的专用红外测试镜片会产生较强的，而专用红外测试镜片的价格较贵。诊断过程中需要做很多的切片测试，也涉及到大量样品架的清洗问题，这样对于样品架的成本消耗非常的大。同时石蜡切片中的石蜡在中红外2956cm^-1，2916cm^-1，2848cm^-1，1461cm^-1，719cm^-1五个波段上会对组织光谱信号产生强烈干扰。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供了一种红外光谱检测技术用于克罗恩病鉴别诊断的制样方法，该技术方案是这样实现的：

一种红外光谱检测技术用于克罗恩病鉴别诊断的制样方法，制样方法具体步骤如下：

1、取合适部位的组织样品后，放入固定液处理使得组织样品韧性增加，典型的固定液为10％-18％的福尔马林溶液。

2、取出固定后的组织样品进行脱水前使用纯水清洗，将清洗后的组织样品顺序放不同浓度的脱水剂进行脱水过程，最常用的脱水剂为乙醇。现在的脱水过程也可以采用专用的脱水机完成。

3、脱水完成后的组织样品进行浸蜡、切片、捞片、烘片过程。

4、采用具有金属镀层的玻璃片作为捞片过程的载具和红外吸收光谱测试的样品架。

5、烘片过程完成后，组织样品石蜡切片进行脱蜡过程，最后进行红外吸收光谱测试。